莱茵衣藻启动子功能检测系统的构建

来源 :中国植物学会植物细胞生物学2012学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hh2006pk
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  雨生红球藻34-1n(Haematococcus plauvialis 34-1n)在强光、盐胁迫和缺氮等条件下会积累大量虾青素,它合成的调控机理是目前研究的热点.β-胡萝卜素酮化酶则是其中的关键酶之一,在强光、盐胁迫和缺氮等条件下,它的转录活性最多可提高40倍,然而现在没有合适的方法对其启动子功能进行研究.因此我们选用莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)作为检测微藻启动子功能的生物系统,并以pSP124质粒为基础,采用雨生红球藻β-胡萝卜素酮化酶基因(bkt1)450bp的启动子片段作为间隔序列,引入两个Eam1105 Ⅰ限制性内切酶位点,构建了莱茵衣藻启动子功能检测T载体,建立莱茵衣藻启动子功能检测系统.将bkt1启动子5端缺失序列——1986bp和200bp的bkt1启动子片段直接克隆到莱茵衣藻启动子功能检测T载体,通过"珠磨法"转化到莱茵衣藻CC-849中,经Zeomycin筛选获得了TranRB-2、TranRB-0.45、TranB-0.45和TranRB-0.2转基因藻.实验结果表明45mM醋酸钠可以提高ble的转化率,它在所有转基因藻中均可检测到,并成功表达了BLE蛋白,使转基因藻具有Zeomycin抗性.初步证明bkt1启动子的450bp序列具有启动子活性,可能是它的核心序列,它的200bp序列则由于失去了TATA-box等必需序列而失去启动子活性.以上实验为研究藻类启动子功能提供了一条新的途径.
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