【摘 要】
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本文利用PCR技术从血清型1/2a的产单核细胞李斯特菌Lm-4株中扩增出actA基因,经克隆筛选和测序鉴定后,构建成该基因的原核表达载体pGEX-6P-1-actA及pET-actA,转入终宿主菌E.co
【机 构】
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扬州大学,生物科学与技术学院,江苏,扬州,225009
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届理事会第二次会议暨教学专业委员会暨第六届代表大会
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本文利用PCR技术从血清型1/2a的产单核细胞李斯特菌Lm-4株中扩增出actA基因,经克隆筛选和测序鉴定后,构建成该基因的原核表达载体pGEX-6P-1-actA及pET-actA,转入终宿主菌E.coli后,IPTG诱导目的蛋白的表达.SDS-PAGE电泳结果表明,actA基因在两种载体中均获得表达,融合蛋白的大小分别约为120KD和97KD.以纯化蛋白为材料进行了ActA单抗的研制,获得四株抗ActA的单克隆抗体杂交瘤细胞株,腹水单抗ELISA效价为1:5×104～1:1×105.选取单抗1A5进行Western-blot分析,结果表明单抗1A5能和表达产物进行特异性反应,且与Lm-4多抗血清的Western-blot结果一致.actA基因的原核表达及单抗的研制为研究ActA蛋白的生物学活性及其致病作用奠定了基础,也为该菌鉴定提供了新试剂.
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