【摘 要】
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目的：在全骨髓法提取C57 小鼠骨髓间充质干细胞的过程中引入差速贴壁交换法,初步探索骨髓间充质干细胞集落的形成过程.方法：实验一：在全骨髓法提取C57 小鼠骨髓间充质干细胞的过程中,采用差速贴壁法将骨髓中的细胞按照贴壁的先后顺序进行分离培养,每隔2h 将已接种但仍未贴壁的细胞重新悬浮和接种至新的细胞培养皿中,进而将细胞分为0～2h 组、2h～4h 组、4h～6h 组、6h～8h组、8h～48h 组
【机 构】
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南方医科大学南方医院惠侨医学中心 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复与组织再生重点实验室暨皮肤损
【出 处】
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第十届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术会议、第三届中欧创面修复学术会议、中国医师协会创伤外科医师分会创面修复医师专业委
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目的：在全骨髓法提取C57 小鼠骨髓间充质干细胞的过程中引入差速贴壁交换法,初步探索骨髓间充质干细胞集落的形成过程.方法：实验一：在全骨髓法提取C57 小鼠骨髓间充质干细胞的过程中,采用差速贴壁法将骨髓中的细胞按照贴壁的先后顺序进行分离培养,每隔2h 将已接种但仍未贴壁的细胞重新悬浮和接种至新的细胞培养皿中,进而将细胞分为0～2h 组、2h～4h 组、4h～6h 组、6h～8h组、8h～48h 组,并观察和比较其形态特征和生长规律；实验二：选取GFP(+)或GFP(-)的C57 小鼠作为研究对象,分为GFP(+)组和GFP(-)组.全骨髓法提取C57 小鼠骨髓细胞.在细胞混悬液恒温孵育4h 后,悬浮起仍未贴壁的骨髓细胞,在GFP(+)组和GFP(-)组间进行交换,并继续孵育至48h,从而获得了"(0～4h 内贴壁)GFP(+)细胞/(4h～48h内贴壁)GFP(-)细胞"混合组A 及"(0～4h 内贴壁)GFP(-)细胞/(4h～48h 内贴壁)GFP(+)细胞"混合组B.继续原代培养上述两组细胞,并观察其中的集落形成过程.结果：在实验一中：0～2h 组和2h～4h 组的细胞形态和生长规律相似,4h～6h 组、6h～8h 组和8h～48h 组的细胞形态和生长规律相似.重复上述实验,将细胞重新分为0～4h 组和4h～48h组,继续孵育3 天,0～4h 组的细胞悉数凋亡,继续孵育10 天,4h～48h 组的细胞相继凋亡；在实验二中："(0～4h 内贴壁)GFP(+)细胞"和"(4h～48h 内贴壁)GFP(-)细胞"混合培养后分别发现了由"(0～4h 内贴壁)GFP(+)细胞"和"(4h～48h 内贴壁)GFP(-)细胞"形成的细胞集落,两种集落的细胞形态有较大差异.结论：通过全骨髓法获得的C57 小鼠"骨髓间充质干细胞"中至少应该含有两种不同的细胞类型(暂命名为"先贴细胞"和"后贴细胞")."先贴细胞"和"后贴细胞"的贴壁时间不同,但在体外培养时相互依存,并共同参与了"骨髓间充质干细胞"的集落形成、和传代.
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