间接原位RT-PCR检测石蜡切片中PRRSV核酸方法的建立

来源 :中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:guilinzd
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根据GenBank收录的ATCCVR-2332株ORF6和ORF7基因序列,用Oligo软件设计一套引物和37bp的寡核苷酸探针.成功建立了能原位检测石蜡组织切片中猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核酸的方法.该引物能特异扩增PRRSV核酸,而对猪瘟病毒(HCV)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪乙脑病毒(JEV)的核酸呈阴性反应.应用该方法检测PRRSVSC-1株人工感染28日龄仔猪的扁桃体、胸腺、肺门淋巴结、脾脏,成功检测到PRRSV核酸.该法可用于仔猪PRRSV感染的诊断和组织中核酸的定位及分布规律研究,特别是用于病毒含量较少的潜伏感染的检测,也可用于甲醛固定组织的回顾性诊断.
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根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲株ATCCVR-2332保守区ORF6和ORF7的基因序列,设计一条37bp的寡核苷酸探,末端用生物素标记.该探针能特异性检测出PRRSV核酸.应用该探针对8头人工感染PRRSVSC-1的28日龄PRRSV抗体检测阴性的猪感染后不同时间体内PRRSV分布时行了研究.结果显示在感染后7天即可在肺脏,肺门淋巴结,胸腺,扁桃体,脾脏,肾脏,脑,肠检测到PRRS