【摘 要】
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[研究目的]为探究ALV-J 引起免疫抑制与exosome 的相关性,通过蛋白质组学技术筛选免疫抑制相关蛋白,体外试验检测exosome 对淋巴细胞免疫活性的影响.[材料与方法]Exosome
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会第二十次学术研讨会
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[研究目的]为探究ALV-J 引起免疫抑制与exosome 的相关性,通过蛋白质组学技术筛选免疫抑制相关蛋白,体外试验检测exosome 对淋巴细胞免疫活性的影响.[材料与方法]Exosomes 提取、鉴定：9-11 日龄SPF 鸡胚,无菌制备原代CEF 细胞,生长至良好稳定状态,接种ALV-J,细胞传代后维持4-5d,进行ALV 抗原检测、IFA 和PCR 检测,用exosome分离试剂盒从收集的细胞上清液中提取exosomes.对提取出的exosome 进行电镜观察是否具备exosome 基本形态,质谱检测有无exosome 特征性蛋白.蛋白挑选：对比分析SDS-PAGE 胶,初步判断有无差异蛋白.将质谱测序结果与公共蛋白数据库和禽的病毒数据库进行同源比较和分析鉴定,挑选免疫抑制相关蛋白.FCM 及ELISA 检测：体外无菌分离SPF 鸡脾脏细胞,摸索exosome 最佳接种量,接种exosomes,分别在接种后不同时间点收集脾细胞和脾细胞培养上清液,FCM 检测细胞表面抗原：CD4 和CD8,ELISA 检测免疫激活因子IL-2、IL-12 和免疫抑制因子IL-10.
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