【摘 要】
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目的：探讨Ik6基因在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)中的表达及其临床意义,体外实验研究IK6基因与ALL的恶性生物学行为的关系,以提高Ik6阳性儿童ALL的临床诊治水平.方法：应用巢式PCR方法检测88例初诊ALL患儿骨髓单个核细胞中IKZF1基因的表达情况;凝胶回收DNA产物片段并对目的基因测序鉴定;应用多重PCR方法检测ALL融合基因的表达;分析Ik6基因的表达与患者临床特征的关系.分别构建
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属协和医院 430022
【出 处】
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中华医学会第十八次全国儿科学术会议
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目的：探讨Ik6基因在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)中的表达及其临床意义,体外实验研究IK6基因与ALL的恶性生物学行为的关系,以提高Ik6阳性儿童ALL的临床诊治水平.方法：应用巢式PCR方法检测88例初诊ALL患儿骨髓单个核细胞中IKZF1基因的表达情况;凝胶回收DNA产物片段并对目的基因测序鉴定;应用多重PCR方法检测ALL融合基因的表达;分析Ik6基因的表达与患者临床特征的关系.分别构建IK6基因过表达及沉默的慢病毒载体,其中,IK6基因过表达的慢病毒载体感染IK6-表达的Nalm-6细胞,IK6基因沉默的慢病毒载体感染IK6+表达的Sup-B15细胞;采用荧光显微镜、流式细胞术检测感染效率,实时荧光定量PCR及免疫印迹法检测Ik6的表达效果.采用CCK-8法和集落形成法检测慢病毒感染后细胞的增殖和集落形成;CCK-8法检测细胞对化疗药物长春新碱(VCR)、柔红霉素(DNR)、门冬酰胺酶(L-Asp)和地塞米松(Dex)的敏感性;采用Annexin-V/FITC PI双染法及流式细胞术检测细胞的凋亡;实时定量PCR和Western Blot法检测化疗药物作用后Ik6的表达.结果：最常见的IKZF1亚型是Ik2/3(73.86％)，其次是Ik1(42.05％)和Ik4(32.95％)。急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)和急性T淋巴细胞白血病(T-LL)中!k6基因的阳性表达率分别是11.43％(8/70)和5.56％(1/18)。在8例Ik6阳性表达的B-ALL患者中，3例BCR/ABL阳性，1例HOX11阳性，4例融合基因表达阴性，其中Ik6的表达与BCR/ABL相关(P<0.01)。分析!k6与患者临床特征的关系发现，Ik6与年龄、白细胞计数、危险度分级及其他遗传学特征无显著相关性(P>0.05)，但与诱导化疗后的微小残留病(minimal residual disease,MRD)高水平相关(P<0.01)。结论：Ik6基因与儿童B-LL不良预后及化疗抵抗相关，且可以作为一个独立的预后不良危险因素。
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