【摘 要】
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目的：课题小组前期研究发现G1后期细胞易被Fas诱导凋亡,本研究通过Hoechst33342染料对细胞DNA进行染色,通过流式细胞仪分选出高纯度G0/G1期和S期细胞.分别测定G0/G1期细胞和S期细胞中抑制凋亡分子的表达来阐明G1后期细胞易被Fas诱导凋亡的机制.本研究的意义在于从分子水平阐明凋亡与细胞周期之间的内在关系,阐明细胞凋亡窗口期的分子机制.方法：利用Hoechst 33342染料分别
【机 构】
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上海交通大学医学院附属新华医院儿内科 200092
【出 处】
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中华医学会第十八次全国儿科学术会议
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目的：课题小组前期研究发现G1后期细胞易被Fas诱导凋亡,本研究通过Hoechst33342染料对细胞DNA进行染色,通过流式细胞仪分选出高纯度G0/G1期和S期细胞.分别测定G0/G1期细胞和S期细胞中抑制凋亡分子的表达来阐明G1后期细胞易被Fas诱导凋亡的机制.本研究的意义在于从分子水平阐明凋亡与细胞周期之间的内在关系,阐明细胞凋亡窗口期的分子机制.方法：利用Hoechst 33342染料分别对MML-1、PEER淋巴瘤细胞进行DNA染色,通过流式细胞仪分选出细胞的DNA倍数不同的G0/G1期和S期细胞,对照组为未分选组.测定G0/G1期细胞、S期细胞和未分选组细胞Fas(终浓度50ng/ml)诱导凋亡(0hr、2hr、4hr)时的细胞凋亡率.通过超声裂解法提取G0/G1期细胞、S期细胞和未分选组细胞胞浆蛋白,Westem blotting测定抑制凋亡分子FLIP、Bcl-2的表达.结果: MML-1,PEER细胞Fas诱导凋亡时的细胞凋亡率结果MML-1,PEER细胞GO/G1期及S期分别经Fas诱导凋亡Ohr,2hr,4hr后测定细胞凋亡率。MML-1分选后S期细胞在Fas诱导凋亡Ohr,2hr,4hr的凋亡率分别为27.8％.32.4％和45.4％;而分选后GO/G1期的凋亡率分别为18.9％，29.0％和30.3％。S期细胞较GO/G1期细胞易被Fas诱导凋亡。PEER分选后S期细胞在Fas诱导凋亡Ohr,2hr,4hr的凋亡率分别为37.2％，52.8％和73.4％;而分选后GO/G1期的凋亡率分别为40.7，48.2％和63.5％。从凋亡率可以判断S期细胞较GO/G1期细胞更易被Fas诱导凋亡。结论：本研究发现，S期细胞较GO/G1期细胞易被Fas诱导凋亡。细胞凋亡抑制分子FLIP蛋白水平在G1后期迅速下调，而分子Bcl-2蛋白水平在G1后期迅速回调。FLIP分子和Bcl-2分子的表达消长可能是G1后期细胞对Fas诱导的凋亡较为敏感的原因之一。
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