【摘 要】
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目的:人端粒酶逆转录酶(hTERT)的高表达和活性升高是肺癌发生发展的重要标志.然而,在肺癌细胞中端粒酶表达和活性异常的机制仍然知之甚少。方法:采用生物素链霉亲和素磁珠下拉技术在肺腺癌细胞中垂钓和鉴定新的hTERT启动子结合蛋白,并通过免疫印迹和染色质免疫沉淀实验分析验证这种蛋白质在hTERT启动子区的结合.利用siRNA或质粒转染肺癌细胞来特异性地敲低或过表达这种蛋白,观察其对hTERT启动子驱
【机 构】
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大连医科大学肿瘤中心肿瘤干细胞研究院 大连医科大学肿瘤中心肿瘤干细胞研究院;中山大学肿瘤防治中心,
【出 处】
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中国病理生理学会第十四届肿瘤专业委员会、第十五届免疫专业委员会联合学术会议
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目的:人端粒酶逆转录酶(hTERT)的高表达和活性升高是肺癌发生发展的重要标志.然而,在肺癌细胞中端粒酶表达和活性异常的机制仍然知之甚少。
方法:采用生物素链霉亲和素磁珠下拉技术在肺腺癌细胞中垂钓和鉴定新的hTERT启动子结合蛋白,并通过免疫印迹和染色质免疫沉淀实验分析验证这种蛋白质在hTERT启动子区的结合.利用siRNA或质粒转染肺癌细胞来特异性地敲低或过表达这种蛋白,观察其对hTERT启动子驱动的荧光素酶的表达,内源性hTERT蛋白的表达以及端粒酶活性的影响.此外,也观察其对肺癌细胞体外增殖和体内的移植瘤小鼠模型的肿瘤生长的影响.通过肺癌组织芯片的免疫组化实验分析这种蛋白和hTERT表达之间的相关性,以及其与肺癌患者的总体生存率之间的关系。
结果:在肺癌细胞中,转录共激活因子CBP能够结合在hTERT启动子区.其过度表达或下调表达可以相应地上调或减弱hTERT启动子驱动的荧光素酶的表达,内源性hTERT蛋白的表达和端粒酶活性.此外,抑制该蛋白也可以显著地抑制肺癌细胞的体内外增殖.在肺癌患者中,CBP的表达与hTERT的表达及肺癌患者的较差预后呈正相关.此外,还发现CBP可以与转录因子Spl相结合,乙酰化Spl并影响其在hTERT启动子区的结合。
结论:研究结果表明,CBP通过结合在hTERT肩动子区上调hTERT的基因表达和肿瘤生长,CBP的过表达则预示着肺癌的不良预后。
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