【摘 要】
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目的：分离和鉴定IRM-2小鼠辐射抗性相关基因.方法：采用SMART技术构建IRM-2小鼠全长cDNA文库,提取雄性IRM-2小鼠脾脏总RNA,以此为模板,通过逆转录酶PowerScript反转录合成第
【机 构】
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中国医学科学院放射医学研究所,天津市分子核医学重点实验室,天津300192
【出 处】
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第七届中国核学会“三核”论坛暨中国毒理学会放射毒理委员会第八次全国会议
论文部分内容阅读
目的：分离和鉴定IRM-2小鼠辐射抗性相关基因.方法：采用SMART技术构建IRM-2小鼠全长cDNA文库,提取雄性IRM-2小鼠脾脏总RNA,以此为模板,通过逆转录酶PowerScript反转录合成第一链cDNA,通过长距离PCR合成并扩增双链cDNA.该扩增产物经纯化、SfiⅠ酶切、去除小于500 bp片段后,将cDNA连接到Sfi Ⅰ消化过的PDNR-LIB质粒载体中,用电转化法将重组质粒转化到大肠杆菌DH5α,得到IRM-2小鼠cDNA原始文库并用PCR法对文库的质量进行鉴定.随机从cDNA文库挑选130个阳性克隆进行测序,与GenBank基因库进行同源性比较.结果：构建的cDNA文库的容量为2.25 ×106个克隆,重组率达95％,平均插入片段长度约1.2 kb,全长基因比例为55％.从cDNA文库挑选的阳性克隆中有21条EST序列与小鼠已知基因不同源,在GenBank的EST数据库的注册号为DW474856 ～DW474876.结论：成功构建了IRM-2小鼠全长cDNA文库,21条EST提示IRM-2小鼠体内可能存在辐射抗性相关基因,为进一步分离和鉴定辐射抗性相关基因奠定了基础.
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