泡桐丛枝植原体质粒膜蛋白p19与泡桐互作蛋白的筛选

• 作 者: 林彩丽[1]郭颂[2]胡佳续[1]宋传生[1]耿显胜[1]周涛[2]范在丰[2]田国忠[1]
• 机 构: 中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所,国家林业局森林保护重点实验室,北京100091
• 出 处: 中国植物病理学会2011年学术年会
• 发表日期: 2011年期

泡桐丛枝病是最早发现由植原体引起的病害之一，植原体是寄生于植物韧皮部筛管细胞缺乏细胞壁的原核微生物。构建泡桐cDNA文库，把含有泡桐cDNA文库的酵母菌AH109与含有诱饵载体pGBKT7P19的酵母菌Y187进行交配，把交配后的菌液直接涂布到SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp四缺培养基上进行筛选。通过两轮四缺培养基筛选和a-X-半乳糖苷酶活性检测，从酵母双杂交的主板上共挑取8个阳性菌落，提取酵母质粒，并转化大肠杆菌，经PCR鉴定后进行测序。将测序结果进行BLAST．其中一个克隆的cDNA序列与拟南芥基因组中的胞质因子/三磷酸甘油酯转移家族Sec14-like蛋白的核苷酸序列具有79％的同源性，并且与豆科作物百脉根、茄科作物番茄以及木本植物杨树等编码的Sec14-Iike基因有较高的同源性。Sec14p蛋白首先在酵母中发现，在分泌小泡的形成和分泌小泡形成后从高尔基体中分泌过程中起着重要的作用。另外一个克隆DNA序列与番茄基因组中的亚硝酸盐氧化酶具有80%的同源性。亚硝酸盐氧化酶SO是线粒体编码的基因，钼离子结合的催化酶。脊椎动物中的SO和细胞色素C结合作为电子传递链中的电子受体，在半胱氨酸和甲硫氨酸氧化降解的最后步骤中，催化亚硫酸盐转化成为硫酸盐。植物拟南芥的SO是真核生物中最小的钼辅助因子组成的钼结合域，且缺乏脊椎动物中SO已知的血红素结合域。植物中的SO不与细胞色素C反应，而属于氧化物复合体的组成成分。SO催化亚硫酸盐转化成为硫酸盐反应中，氧作为亚硫酸盐氧化反应的电子受体产物为硫酸盐和过氧化氢(H202)。研究结果将有助于从分子和细胞生物学的水平理解植原体与寄主植物间的互作关系及致病机制，但需要进一步的蛋白体内互作验证。