孕激素对斜带石斑鱼kiss基因启动子的调控研究

• 作 者: 国晨雨;董世丽;郭银;刘晓春;林浩然;
• 机 构: 中山大学生命科学大学院水生经济动物研究所,广东省水生经济动物良种繁育重点实验室,广州510275
• 出 处: 第五届“全国石斑鱼类繁育与养殖产业化”论坛
• 发表日期: 2014年期

　　孕激素的功能受孕激素核受体(progesterone nucleareceptor nPR)的调控,即孕激素以自由扩散形式通过质膜,并与nPR紧密结合,通过结合靶基因上的激素应答元件(hormone response element HRE),调节基因表达或与其他核蛋白相互作用改变基因的转录活性,此种功能被称为孕激素的基因组效应(genomic action of progesterone)。根据已知的斜带石斑鱼nPR,mPRp和mPRγ的cDNA序列, 组织分布结果显示：nPR在嗅球及垂体中表达量最高,可能参与孕激素的反馈调节,mPRβ和mPRγ则在鳃中表现出极高的表达量,推测这两个膜受体对斜带石斑鱼的离子和渗透压调节起着重要的作用。通过用两种孕激素17α,20β-双羟孕酮(DHP)和17α,20β,21-三羟孕酮(20β-S)对斜带石斑鱼的卵巢进行离体孵育实验,当用浓度为1-1000nM的20β-S体外处理6小时,1nM的20β-S就能显著性的降低mPRα的表达,而处理时间增至9小时时,100nM或1000nM的20β-S能显著性的上调mPRα的表达。这一结果的产生可能是因为处理6h时消耗了受体,使得mPRα表达量下降,而当处理时间延长至9小时时,高浓度的20β-S使得受体开始重新合成导致mPRα表达量显著上升。在线软件Transcription Element Search Software(TESS)分析发现斜带石斑鱼kissl和kiss2基因上游启动子上分别有2个和7个孕激素受体结合原件。利用已构建好的kissl启动子,kiss2启动子以及PR表达载体,检测kiss1,kiss2启动子在HEK293cell中的转录活性,进而研究三种孕激素(DHP,20β-S和P4)对两种kiss基因启动子转录活性的影响。对卵巢发育处于EV期的斜带石斑鱼鱼腹腔注射DHP(2ug/g bodyweight),24小时后检测下丘脑两种kiss基因的表达变化。结果显示与对照组相比,无论是kissl还是kiss2基因,mRNA表达水平均有显著的上升。而对于切除卵巢的斜带石斑鱼来说,腹腔注射DHP后血清中E2,T和DHP的水平都有明显的下降。通过研究孕激素对斜带石斑鱼两种kiss基因转录调节的分子机制,为阐明鱼类的生殖内分泌调控机制提供重要的参考资料。