Klebsiella pneumoniae XJPD-Li的甘油脱水酶克隆表达及其定点突变研究

来源 :第五届全国化学工程与生物化工年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shengli46
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  采用PCR技术扩增得到Klebsiella pneumoniae XJPD-Li的甘油脱水酶dhaBCE连接到表达载体PET-28a(+)上,获得重组质粒PET-28a(+)-dhaBCE,并将其转化到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。序列分析结果表明:片段长度为2693bp,α亚基1668bp,β亚基585bp, γ亚基426bp,分别编码555, 194和141个氨基酸,计算分子量分别为60541Da, 21268Da和16068Da。测序片段与GenBank中报道的K.pneumoniae甘油脱水酶编码基因相似性为99.41%,氨基酸相似性为99.33%。氨基酸残基的存在可能与酶的高温和偏碱环境的耐受性有关。同时,探讨了氨基酸残基对于甘油脱水酶结构与功能的影响。
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本研究首次以乙酸酐和芳樟醇为底物用脂肪酶催化法合成乙酸芳樟酯,考察了不同种类的商品脂肪酶对该反应的催化效果,获得了一种对该反应催化效率较高的脂肪酶MML (Mucor miehei ),同时研究了不同种类固定化载体对该脂肪酶活性的影响,确定了其最佳固定化条件;固定化载体为大孔树脂,在pH为6.4,大孔树脂与酶质量比为2.5:1,缓冲液为KZHP04-KHZP04时,其固定化效果最好。
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