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目的通过研究人早孕胎盘滋养细胞上的AQP3表达的环磷酸腺苷-蛋白激酶A(cyclic adenosine monophosphate-protein kinase A,cAMP-PKA)信号转导通路,明确人早孕胎盘滋养细胞AQP3表达的调控机制。方法原代培养及鉴定正常人早孕胎盘滋养细胞,对细胞进行处理:①cAMP激动剂Forskolin处理人早孕胎盘滋养细胞,不同浓度Forskolin(0、0.5、5、50、100μmol/L)作用12h和最佳浓度Forskolin不同作用时间(0、6、12、24、48h)。同时加入等量的DMSO作为溶剂对照组。②PKA激动剂SP-cAMP处理人早孕胎盘滋养细胞,不同浓度SP-cAMP(0、5、10、50、100μmol/L)作用24h和最佳浓度SP-cAMP不同作用时间(0、6、12、24、48h)。③PKA抑制剂H-89处理人早孕胎盘滋养细胞,不同浓度H-89(0、5、10、50、100μmol/L)作用4h和最佳浓度H-89不同作用时间(0、2、4、8、12h)。④最佳浓度的Forskolin作用12h后加入最佳浓度H-89处理人早孕胎盘滋养细胞8h。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞内cAMP含量及PKA活性表达变化,免疫细胞化学染色方法检测AQP3定位,蛋白质印迹技术检测总CREB、磷酸化CREB(p-CREB)和AQP3蛋白表达水平。①②③不同作用时间组设置空白对照,不同浓度组采用CCK-8法检测细胞增殖率。结果 (1)免疫细胞化学染色方法发现AQP3蛋白表达在人早孕胎盘滋养细胞的胞浆及胞膜,以胞浆为主。(2)不同浓度的Forskolin、SP-cAMP和H-89对人早孕胎盘滋养细胞的增殖率无显著性差异(P>0.05)。(3)空白对照组总CREB、p-CREB、AQP3蛋白、细胞内cAMP含量和PKA活性表达在不同作用时间均未见显著性差异(P>0.05)。(4)不同浓度的Forskolin作用细胞12h后,cAMP含量、PKA活性、p-CREB和AQP3蛋白表达在5μmol/L Forskolin作用组较0μmol/L作用组明显上调,差异有统计学意义(P<0.05),5μmol/L Forskolin作用组中cAMP含量、PKA活性和AQP3蛋白表达明显高于0.5μmol/L和50μmol/L组(P<0.05);最适浓度(5μmol/L)Forskolin作用12h组比0h组明显上调,差异有统计学意义(P<0.05),Forskolin作用12h组cAMP含量、PKA活性、p-CREB和AQP3蛋白表达明显高于6h组和24h组(P<0.05。总CREB表达在各浓度组和各时间组均无显著性差异(P>0.05)。(4)不同浓度的SP-cAMP作用细胞24h后,PKA活性、p-CREB和AQP3蛋白表达在SP-cAMP10μmol/L组较0μmol/L组显著上调,差异有统计学意义(P<0.05),SP-cAMP10μmol/L组中,PKA活性、p-CREB和AQP3蛋白表达明显高于5μmol/L和50μmol/L组(P<0.05);最适浓度(10μmol/L)SP-cAMP作用12h组比0h组明显上调,差异有统计学意义(P<0.05),SP-cAMP作用12h组PKA活性、p-CREB和AQP3蛋白表达明显高于6h组和24h组(P<0.05)。cAMP含量及总CREB表达在各浓度组和各时间组均无显著性差异(P>0.05)。(5)不同浓度的H-89作用细胞4h组,pKA活性、p-CREB和AQP3蛋白表达下调在H-89 10μmol/L组较0μmol/L组明显下调,差异有统计学意义(P<0.05),10μmol/L H-89作用组中PKA活性、p-CREB和AQP3蛋白表达明显低于5μmol/L,差异有统计学意义(P<0.05),但H-89 10μmol/L组与50μmol/L比较,PKA活性、p-CREB和AQP3蛋白表达未见显著性差异(P>0.05);最适浓度(10μmol/L)H-89作用8h组较0h组明显下调,差异有统计学意义(P<0.05),H-89作用8h组PKA活性、p-CREB和AQP3蛋白表达明显低于4h组(P<0.05),但和H-89作用12h组比较未见显著性差异(P>0.05)。cAMP含量及总CREB表达在各浓度组和各时间组均无显著性差异(P>0.05)。(6)Forskolin+H-89组处理人早孕胎盘滋养细胞后,cAMP含量较空白对照组及H-89处理组均明显上调(P<0.05),与Forskolin处理组无明显差异。PKA活性、p-CREB和AQP3蛋白表达较Forskolin处理组明显下调(P<0.05),但高于H-89处理组,差异有统计学意义(P<0.05)。总CREB表达在各组之间无显著性差异(P>0.05)。结论 Forskolin可上调人早孕胎盘滋养细胞cAMP含量、PKA活性、p-CREB及AQP3蛋白表达,SP-cAMP可上调人早孕胎盘滋养细胞PKA活性、p-CREB及AQP3蛋白表达,H-89可下调人早孕胎盘滋养细胞PKA活性、p-CREB及AQP3蛋白表达,且Forskolin+H-89处理组p-CREB和AQP3蛋白表达水平较Forskolin处理组明显下调,表明PKA活性增加在Forskolin上调AQP3蛋白表达的过程中起重要作用,提示cAMP-PKA信号转导通路可以调控人早孕胎盘滋养细胞中AQP3蛋白的表达。