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目的 本研究探讨炎症微环境下,牙龈间充质干细胞乙酰化修饰的改变,并观察曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)体外条件下抑制炎症牙龈间充质干细胞中IL-6、IL-8炎性因子的产生,为牙周炎药物治疗提供新的方法.方法 1.牙龈干细胞的体外培养及生物学鉴定.选取牙周健康及慢性牙周炎患者的牙龈,采用酶消化法进行原代培养.取生长状况良好的第二代牙龈干细胞,测定细胞克隆形成率,倒置显微镜下逐日观察细胞的生长状态及细胞倍增能力.流式细胞仪检测并分析其表面抗原CD146、CD90、SSEA-4、OCT-4的表达.取生长状态良好的第三代牙龈干细胞进行成骨和成脂诱导,分别进行碱性磷酸酶染色、茜素红染色和油红O染色,检测成骨分化和成脂分化情况.2.RT-PCR法检测组蛋白去乙酰化酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ类,即HDAC1-11在健康及炎症牙龈干细胞中的表达差异,计算相对灰度值并进行半定量分析.3.MTT法检测不同TSA对细胞增殖的影响,流式细胞术分析Annexin V表达以检测TSA对细胞凋亡影响,选取最佳的TSA浓度.4.RT-PCR检测正常及炎症牙龈干细胞中炎症因子IL-6、IL-8的表达,及加入TSA后24h检测IL-6、IL-8表达的差异性,计算相对灰度值并进行半定量分析.5.健康及炎症牙龈干细胞中分别加入LPS(1μg/ml)及TSA(100nM)于6h、24h、48h,取上清液,并通过流式细胞术Cytometric Bead Array(CBA)分析IL-6、IL-8含量.结果 1.通过酶消化法获得的健康及炎症牙龈干细胞,镜下呈巢式生长,细胞排列紧密,周边细胞呈短梭形,体积较小.流式细胞仪检测并分析其表面抗原CD146,CD90,SSEA-4,OCT-4高表达.牙龈干细胞在成骨诱导液的作用下,细胞复层生长,碱性磷酸酶染色可见细胞胞浆蓝染,诱导21天后可观察到钙结节形成,经茜素红染色呈橘红色或红色.在成脂诱导28天后可见个别细胞胞浆内出现高强度的折射点,油红O染色呈橙红色.2.RT-PCR琼脂糖凝胶电泳可见与健康牙龈组织来源的牙龈干细胞相比,HDAC1、2、3、4、5、7、9、10、11在炎症牙龈组织来源的间充质干细胞中表达都有明显的升高.3.通过MTT检测对细胞增殖及流式分析对细胞凋亡的影响,确定TSA的最佳浓度为100nM.4.RT-PCR琼脂糖凝胶电泳可见,与健康牙龈组织来源的牙龈干细胞相比,IL-6、IL-8在炎症及加入LPS刺激后的牙龈干细胞中表达升高,通过加入TSA(100nm) 24h后可见明显降低.5.流式细胞术CBA分析培养液上清中IL-6、IL-8含量,在加入TSA(100nM) 6h、24h、48h后可见IL-6、IL-8显著降低,同时在24h结果表达更加明显.结论 1.牙龈组织中存在可体外分离培养的间充质干细胞,表达干细胞标志物CD90、CD146、OCT4、SSEA-4,具有较高的克隆形成和多向分化能力；2.人炎症牙龈干细胞中组蛋白去乙酰化酶1、2、3、4、5、7、9、10、11均表达升高,可能与牙周炎炎症反应的基因相关；3.组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA能够在基因和蛋白水平上抑制炎症的产生,提示TSA可能作为控制牙周炎炎症反应的药物,牙周炎的治疗提供新的药物方法.