论文部分内容阅读
目的：如何阐明具有抗肿瘤活性的天然产物的作用机制,是从中药中开发抗癌新药的关键步骤之一。我们在前期研究中发现,从云南藤黄中分离得到的PPAP类化合物OblongifolinC(OC)具有多种抗肿瘤活性,其作用机制包括诱导细胞凋亡、抑制自噬及抑制转移等。然而,其作用的具体蛋白质靶点还不清楚。我们在本课题中运用多种技术,找到了OC的作用靶点,为进一步通过化学修饰开发新的OC衍生物成为新的抗肿瘤药物提供了科学依据。方法：(1)蛋白质Fishing及质谱分析：我们利用Polystyrene管将OC固定与管壁内,再将细胞裂解液加入试管中混合过夜；之后利用超声将与OC结合的蛋白质洗脱并利用蛋白质质谱分析。(2)蛋白质与OC结合的验证：我们利用Biotin标记的OC去沉淀细胞裂解液中的蛋白,从而验证OC与HSP70或Cath B都可以结合；我们还通过Biacore SPR、Elisa等技术验证了这两个蛋白与OC结合的强度；(3)我们在细胞水平观察了OC对蛋白质的影响。结果：(1)OC或Biotin-OC可以从细胞裂解液中将HSP70、Cath B沉淀出来；(2)在体外实验中,OC可以和HSP70、Cath B结合；并抑制Cath B的水解酶活性；(3)在细胞水平,OC可以显著抑制HSP70、Cathepsin B的生物学活性。结论：HSP70、Cathepsin B是OC的蛋白质作用靶点；OC可通过抑制多个蛋白的活性来抑制肿瘤生长。