【摘 要】
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目的 研究七叶皂苷的肾细胞毒性与热休克蛋白(HSP)表达水平间的关联,并初步探讨代谢对七叶皂苷毒性的影响.方法 MDCK细胞导入pHSE-SEAP质粒,以热休克与重金属刺激考察模型的有效性；通过检测分泌型碱性磷酸酶(SEAP)活性,研究七叶皂苷对MDCK细胞内HSP表达水平的影响,同时用MTT法考察七叶皂苷对MDCK细胞存活率的影响.用β-葡萄糖醛酸苷酶(β-GU)水解七叶皂苷,MTT法检测酶解前
【机 构】
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北京大学公共卫生学院毒理系,北京100191 北京大学药学院天然药物及仿生药物国家重点实验室,北京
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目的 研究七叶皂苷的肾细胞毒性与热休克蛋白(HSP)表达水平间的关联,并初步探讨代谢对七叶皂苷毒性的影响.方法 MDCK细胞导入pHSE-SEAP质粒,以热休克与重金属刺激考察模型的有效性；通过检测分泌型碱性磷酸酶(SEAP)活性,研究七叶皂苷对MDCK细胞内HSP表达水平的影响,同时用MTT法考察七叶皂苷对MDCK细胞存活率的影响.用β-葡萄糖醛酸苷酶(β-GU)水解七叶皂苷,MTT法检测酶解前后七叶皂苷对HK-2细胞的毒性差异,高效液相色谱法检测酶解前后七叶皂苷主要成分的含量变化.结果 热休克处理或1 μmol· L-1的HgCl2使MDCK细胞的HSP表达上调,而10 μmol·L-1的HgCl2或CdCl2降低细胞内的HSP表达水平.不同浓度的七叶皂苷钠作用细胞24 h后,分别在恢复24及48 h的SEAP活性显著低于对照组(P＜0.01),而同浓度的七叶皂苷钠作用MDCK细胞后,其存活率与SEAP活性的变化趋势不完全相同.较低浓度(5,10和15 μmol·L-1)的七叶皂苷钠在降低细胞HSP表达水平的同时未表现出细胞毒性作用,细胞存活率显著高于对照组(P＜0.05).较高浓度(25和30μmol·L-1)的七叶皂苷钠则表现出明显的细胞毒性作用,细胞存活率显著低于对照组(P＜0.01).经β-GU水解后,较高浓度(20和30 μmol·L-1)的七叶皂苷钠细胞毒性显著低于酶解前(P＜0.05)；七叶皂苷中四个主要成分的含量随水解时间延长而逐渐减少.结论 七叶皂苷可显著降低MDCK细胞内的热休克蛋白表达水平,减弱细胞的损伤修复能力.七叶皂苷经β-葡萄糖醛酸苷酶水解后,其肾细胞毒性降低.
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