dlk1在非小细胞肺癌中异常高表达的分子机制研究

• 作 者: 谭金晶;刘宇;高燕宁;
• 机 构: 100021 北京,中国医学科学院北京协和医学院肿瘤肿瘤研究所病因及癌变研究室
• 出 处: 全国肿瘤病因学和肿瘤流行病学学术会议
• 发表日期: 2013年期

　　目的：肺癌是发病率和死亡率最高的癌症之一,严重危害人类健康.本课题组前期基于表达谱芯片数据分析,发现dlk1基因在人肺鳞癌肿瘤组织中异常高表达.dlk1在多种肿瘤中异常表达,如肾细胞癌,肝细胞癌,急性髓细胞性白血病等.而导致dlk1异常表达的调控机制在不同肿瘤中存在差异,已有报道的调控方式有拷贝数变异、印迹丧失、DNA甲基化异常改变等.非小细胞肺癌(NSCLC)中导致dlk1表达上调的分子机制尚不清楚.本研究旨在探讨NSCLC中调控dlk1异常表达的分子机制.方法：我们首先对207例非小细胞肺癌石蜡包埋组织进行免疫组织化学染色,对芯片结果进行验证.利用Real-time PCR的方法在17对NSCLC癌组织及配对癌旁组织中检测dlk1基因拷贝数改变情况.随后,利用甲基化特异PCR(MSP)的方法在NSCLC细胞系和肿瘤组织中检测dlk1印迹调控区IG-DMR的DNA甲基化状态,分析dlk1基因印迹维持情况.最后,采用研究DNA甲基化的金标准,亚硫酸盐测序法,检测NSCLC组织中dlk1相关区域的DNA甲基化水平,结合dlk1表达水平分析两者的相关性.结果：免疫组化结果显示,DLK1蛋白在73.4％ (152/207)的NSCLC肿瘤组织中表达异常升高.基因组拷贝数分析结果显示dlk1在NSCLC中几乎不存在拷贝数扩增现象.IG-DMR在96.3％ (26/27)已检测的样本中维持差异甲基化状态,提示印迹缺失不是导致NSCLC组织中dlk1表达升高的主要因素.5-aza细胞实验证实dlk1的表达受DNA甲基化影响.亚硫酸盐测序结果发现,dlk1启动子区CpG岛的DNA甲基化水平与dlk1的表达水平呈显著相关性.结论：dlk1启动子区的异常低DNA甲基化导致NSCLC中DLK1蛋白水平异常升高.