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目的：为了构建编码人内皮抑素/人血清白蛋白的重组表达质粒，并在毕赤酵母(Pichia pastoris)中获得高效表达。
方法：通过重叠延伸PCR的方法，将ES和HSA两片断连接，并将其克隆入pGEM-T载体中，测序正确后，将其克隆至酵母表达载体pPIC9中，然后将鉴定正确的重组表达载体pPIC9-ES/HSA线性化后转化入GS115宿主菌。采用原位双膜法筛选表达株，并将其进行PCR鉴定后扩大培养，获得的含融合蛋白的培养液盐析后经阳离子交换层析、阴离子交换层析和亲和层析纯化，采用MTT法测定融合蛋白中内皮抑素的活性。
结果：成功构建了人内皮抑素/人血清白蛋白的重组表达质粒pPIC9-ES/HSA，并筛选到表达较为理想的重组菌株pPIC9-ES/HSA-GS115，经甲醇诱导表达后纯化，融合蛋白的纯度达到92％以上，并具有抑制人血管内皮细胞系ECV-304细胞的增殖活性。
结论：成功获得了具有人内皮抑素生物活性的重组人内皮抑素/人血清白蛋白融合蛋白，该研究结果未见文献报道。