【摘 要】
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屎肠球菌是一种革兰氏阳性的条件致病菌.当机体免疫力低下时,会造成多种局部及全身的感染性疾病.烈性噬菌体是一种特异性感染和杀死宿主菌的病毒.噬菌体裂解酶是在感染后期由噬菌体基因组编码的一种可以水解细胞壁的蛋白酶.由于耐药菌株的广泛出现和新型抗菌药物的缺乏,噬菌体及其裂解酶成为了研究的热点.本研究以耐万古霉素的屎肠球菌4P-SA为宿主菌分离得到了一株烈性噬菌体,将其命名为EFm5,并对其一般生物学特征
【出 处】
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2016第六届中国兽药大会(中国畜牧兽医学会动物药品学分会第五届全国会员代表大会暨2016学术年会、中国微生物学会兽医微
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屎肠球菌是一种革兰氏阳性的条件致病菌.当机体免疫力低下时,会造成多种局部及全身的感染性疾病.烈性噬菌体是一种特异性感染和杀死宿主菌的病毒.噬菌体裂解酶是在感染后期由噬菌体基因组编码的一种可以水解细胞壁的蛋白酶.由于耐药菌株的广泛出现和新型抗菌药物的缺乏,噬菌体及其裂解酶成为了研究的热点.本研究以耐万古霉素的屎肠球菌4P-SA为宿主菌分离得到了一株烈性噬菌体,将其命名为EFm5,并对其一般生物学特征进行了研究.电镜结果显示EFm5属于有尾噬菌体目、长尾噬菌体科.全基因组测序结果表明EFm5的基因组为双链DNA,共42265bp,G+C含量为35.51％,包含70个ORF.但是由于EFm5的裂解谱较窄,在23株屎肠球菌中仅能裂解其中一株菌,这严重制约了EFm5的治疗性应用.因此本实验对EFm5的裂解酶LysEFm5进行了深入研究.LysEFm5有比它的亲本噬菌体更宽的裂解谱,能够裂解23株屎肠球菌中的19株,其中包括7株耐万古霉素的屎肠球菌.通过NCBI比对以及软件预测表明LysEFm5含有一个N端的amidase片段,单位点突变分析、圆二色谱以及酶谱实验表明LysEFm5含有3个锌离子结合位点(H27、H132和C140).其关键催化作用是E90和T138.经EDTA处理后的蛋白没有影响其活性,这说明LysEFm5的催化活性与锌离子的存在并没有直接关系,这一结果与amidase家族的大部分成员是不一致的.本研究所获得的裂解酶LysEFm5在对抗耐药性屎肠球菌感染方面有很大的潜力.
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