【摘 要】
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[目的]从分泌抗磺胺类单克隆抗体的杂交瘤细胞(4C7)中,克隆出4C7杂交瘤细胞重链和轻链可变区(VH和VL)基因,构建抗磺胺类药物单链抗体(scFv)的原核表达载体,并进行scFv基
【机 构】
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中国农业大学动物医学院,北京,100193
【出 处】
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2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会
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[目的]从分泌抗磺胺类单克隆抗体的杂交瘤细胞(4C7)中,克隆出4C7杂交瘤细胞重链和轻链可变区(VH和VL)基因,构建抗磺胺类药物单链抗体(scFv)的原核表达载体,并进行scFv基因的蛋白表达.(方法)从4C7杂交瘤细胞中提取总RNA,鉴定其大小和纯度后,采用RT-PCR扩增出339bp的VH基因和342bp的VL基因；通过在引物上设计linker序列,引入(Gly4 Ser)3柔性短肽,拼接VH和VL为完整的scFv基因.将测序正确的scFv基因克隆入PJB-33表达载体,转化入E.coli RV308进行蛋白的可溶性表达.通过SDS-PAGE,Western blot法分析其表达水平和特异性,酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴定其抗原结合活性.[结果]结果显示,本实验成功从分泌抗磺胺类药物单克隆抗体的杂交瘤细胞(4C7)中克隆出抗体的重链及轻链可变区基因,并成功构建scFv基因,所得的基因全长约为1000bp,编码约250个氨基酸.SDS-PAGE和Western blot分析表明,该scFv基因在E.coli RV308可表达为约35KD的可溶型scFv蛋白.间接ELISA检测结果表明,可溶型scFv蛋白与磺胺噻唑(ST)具有一定的结合活性.[结论]我们制备并初步鉴定了针对磺胺类药物的单链抗体,为研究小分子与抗体作用机制奠定了实验基础.
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