【摘 要】
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目的 构建miR-133a重组慢病毒载体,观察其转染后对L6成肌细胞增殖、分化及转录因子MyoD、SRF的影响.方法 构建含miR-133a的重组慢病毒表达载体,转染L6成肌细胞,以实时定
【出 处】
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全国手部功能重建研讨会、中华医学会手外科学分会华北地区第十届手外科学术会议暨内蒙古自治区第三届手外科学术会议
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目的 构建miR-133a重组慢病毒载体,观察其转染后对L6成肌细胞增殖、分化及转录因子MyoD、SRF的影响.方法 构建含miR-133a的重组慢病毒表达载体,转染L6成肌细胞,以实时定量PCR(Taqman探针法)对miR-133a基因表达水平进行检测；细胞计数试剂盒(CCK-8)试验评价miR-133a过表达后对L6成肌细胞增殖分化的影响；倒置荧光显微镜观察L6成肌细胞增殖分化的影响；Western blot法检测转录因子MyoD、SRF蛋白表达水平的变化.结果 构建的miR-133a重组慢病毒载体经质粒酶切和测序鉴定正确；与对照组比较,转染L6成肌细胞24h后,miR-133a基因的相对表达量明显增加(P＜0.01)；微小RNA-133a对L6细胞增殖数量明显增加(P＜0.01),对L6成肌细胞的分化无明显作用(P＜0.01),MyoD、SRF的表达量逐渐下降(P＜0.01).结论 1.成功构建miR-133a重组慢病毒表达载体并转染L6成肌细胞后可高效表达miR-133a,可促进体外L6成肌细胞增殖抑制分化,并且为下一步体内实验奠定了基础.2.体外过表达miR-133a促进成肌细胞增殖,其机制与下调转录因子MyoD、SRF表达有关.
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