【摘 要】
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目的 通过观察内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthesis,eNOS)及其上游信号转导通路的变化,探讨通心络改善血管内皮功能的分子机制。方法 利用高蛋氨酸饮食诱导Wistar大鼠高同型胱氨酸血症,并利用通心络进行干预。离体血管环技术分析动脉的舒张情况,并检测eNOS的表达变化。利用人P-1、NFKB、IIRE及eNOS报告基冈质粒稳定转染人脐静脉内皮细胞
【机 构】
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第二军医大学国际合作生物信号转导研究中心,东方肝胆外科研究所,上海200438,中国
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目的 通过观察内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthesis,eNOS)及其上游信号转导通路的变化,探讨通心络改善血管内皮功能的分子机制。方法 利用高蛋氨酸饮食诱导Wistar大鼠高同型胱氨酸血症,并利用通心络进行干预。离体血管环技术分析动脉的舒张情况,并检测eNOS的表达变化。利用人P-1、NFKB、IIRE及eNOS报告基冈质粒稳定转染人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cell,HUVEC),并利用通心络进行干预,荧光素酶报告基因技术分析各报告基因的表达变化,免疫印迹技术分析eNOS蛋白的表达变化,硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)的含量。利用HIF-1,PI-3K及Akt的显性负性突变体瞬时转染HL-VEC,探讨PI-3K/Akt/ⅢF信号通路在通心络诱导eNOS表达中的作用。结果 通心络能够显著上调动脉组织中eNOS的表达及离体动脉环的内皮依赖性舒张功能,不同剂量的通心络还能够显著增强HRE及eNOS报告基因的表达,并显著上调eNOS的蛋白表达。同时,通心络剂量依赖性的提高IIUVEC培养清液中的NO水平,利用HIF-1,PI-3K及Akt的显性负性突变体DNHIF,△p85和DN-Akt分别抑制HIF-1的活性和PI-3K/Akt的表达后,均能减弱通心络对HRE报告基因的激活及eNOS的诱导作用。结论 通心络可通过PI-3K/Akt/HIF依赖的信号通络上调eNOS的表达,进而改善血管内皮依赖性舒张功能。
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