【摘 要】
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为了了解长期使用氟苯尼考的猪场土壤中氟苯尼考耐药基因的分布情况,我们通过宏基因组学的方法直接提取土壤总DNA,使用Covaris System超声波打断仪将DNA打碎成大小约～3k的片段,以小片段质粒为载体,将DNA片段与载体质粒连接并电转化至宿主菌——E.coli DH5α中,构建了土壤宏基因组文库.我们对该文库进行氟苯尼考抗性功能筛选,得到2株阳性克隆子,通过对插入片段测序并分析发现,其中一个
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨
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为了了解长期使用氟苯尼考的猪场土壤中氟苯尼考耐药基因的分布情况,我们通过宏基因组学的方法直接提取土壤总DNA,使用Covaris System超声波打断仪将DNA打碎成大小约～3k的片段,以小片段质粒为载体,将DNA片段与载体质粒连接并电转化至宿主菌——E.coli DH5α中,构建了土壤宏基因组文库.我们对该文库进行氟苯尼考抗性功能筛选,得到2株阳性克隆子,通过对插入片段测序并分析发现,其中一个片段含有一个编码转录调控因子的soxS的基因,该基因主要参与AcrAB-TolC外派泵的正向表达调控,可增强菌体对多种药物的抗性.另外一个插入片段含有3个完整的ORF,一个是编码乙酰丝氨酸外排蛋白(O-acetylserine/cysteine export protein)的EamA家族蛋白；同时还包括两个多重耐药调控基因marA和marR,而MarA和MarR均属于外排调节系统Mar操纵系统的调节蛋白,MarR可正向调控MarA,该系统可通过增强AcrAB和TolC的表达而使菌体产生多重耐药性.另外我们通过氟苯尼考的药敏试验发现,与含有空载体的转化子相比,含有soxS基因的转化子与含有marA和marR基因的转化子的MIC值均有不同程度的提高.本研究的方法及结果证明了利用小片段质粒构建土壤宏基因组文库并筛选抗性基因的可行性,并揭示了在长期使用氟苯尼考的猪场土壤中确实存在耐药基因的分布,并且可能通过水平传播的方式进入人类环境,给人类健康带来潜在的危险.
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