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目的:建立实时荧光定量逆转录-多聚酶链反应(real - time quantitative,RT-PCR)检测人外周血淋巴细胞中FOXP3 mRNA表达的方法,并验证其与流式细胞术检测CD4+CD25+Treg表达的相关性。
方法:提取人外周血单个核细胞总RNA,逆转录成mRNA,采用实时荧光定量RT- PCR检测哮喘急性发作患儿及同龄对照的FOXP3 mRNA表达;同时采用流式细胞技术检测CD4+CD25+ Treg的比例。
结果:患儿组FOXP3 mRNA的表达一般低于对照组(P<0.05),与CD4+CD25+Treg的比例有一定的相关性。
结论:本研究所建立的用于检测人外周血淋巴细胞中FOXP3 mRNA表达的实时荧光定量RT-PCR方法,是一种快速有效、灵敏度高、特异性好的定量检测方法,与流式细胞术检测CD4+CD25+Treg表达具有良好相关性,哮喘患儿CD4+CD25+Treg明显降低可能参与哮喘发病,FOXP3表达降低可能是导致CD4+CD25+Treg发育障碍的重要因素。