【摘 要】
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为在真核表达系统中高效表达柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶3(Emeria tenella calcium-dependent protein kinase,EtCDPK3),获得有活性的天然蛋白,本研究利用毕赤酵母表达
【机 构】
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上海师范大学生命与环境科学学院,上海200234
【出 处】
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上海市畜牧兽医学会2013年学术年会
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为在真核表达系统中高效表达柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶3(Emeria tenella calcium-dependent protein kinase,EtCDPK3),获得有活性的天然蛋白,本研究利用毕赤酵母表达系统对该基因进行了表达.将EtCDPK3基因连接到毕赤酵母表达载体pPIC9k上,构建了重组质粒pPIC9k-EtCDPK3.重组质粒通过电激转化入酵母细胞GS115后,用组氨酸缺陷培养基和G418分别进行筛选,获得含重组质粒的酵母表达细胞.重组酵母细胞在含1％甲醇的BMMY培养基中诱导产生目的蛋白,培养收集1-4 d的部分上清.经SDS-PAGE检测,所表达的蛋白相对分子质量约为49 KDa.Western blot表明,该蛋白能与兔抗EtCDPK3血清特异性结合.结果表明,柔嫩艾美耳球虫CDPK3基因在毕赤酵母中成功的进行了表达,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础.
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