【摘 要】
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目的:本研究为建立荧光定量RT-PCR检测猪PD-1及其配体PD-L1 mRNA的方法。方法:根据GenBank中猪PD-I和PD-L1的基因序列，分别设计2对特异性引物，PCR扩增目的基因片段，回收与pMD18-
【机 构】
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新乡学院,生物技术研究中心,生命科学与技术系,河南新乡,453003
【出 处】
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河南省畜牧兽医学会第八届会员代表大会暨2013年学术研讨会
论文部分内容阅读
目的:本研究为建立荧光定量RT-PCR检测猪PD-1及其配体PD-L1 mRNA的方法。方法:根据GenBank中猪PD-I和PD-L1的基因序列，分别设计2对特异性引物，PCR扩增目的基因片段，回收与pMD18-T连接后转化DH5α，提取重组质粒，作为标准品，制备标准曲线，并进行特异性、重复性和应用性检测。结果:标准曲线PD-1和PD-L1两个样品相关系数R2分别为0.997和0.998，均大于0.99，线性关系好，扩增效率分别为86.03％和102.40％;溶解曲线出现狭窄单一峰，荧光定量PCR产物经琼脂糖凝胶电泳，出现单一目的条带，无引物二聚体，特异性强;检测PD-1和PD-L1组间的变异系数分别为0.592％和0.847％，重复性好;应用性结果表明，正常猪外周血单核细胞中PD-1和PD-L1的基因表达水平稳定，该检测方法的稳定性好。结论:本试验建立了实时荧光定量RT-PCR检测猪PD-1和PD-L1基因表达量的方法。本研究建立的荧光定量RT-PCR检测PD-1和PD-Ll的基因表达模式，为进一步研究猪免疫抑制性传染病如CSF、PRRS感染后，PD-1和PD-L1的表达模式奠定基础，从而进一步丰富猪免疫抑制性传染病引起的免疫抑制机理。
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