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内皮细胞在维持血管内环境稳态中发挥着关键作用.正常内皮细胞通过其内分泌及旁分泌作用合成的细胞因子发挥维持血管内环境稳态的功能,诸如调节血管张力、抑制平滑肌细胞增殖、抗炎、抗血小板聚集以及抗凝血等.在应激或各种病理因素刺激下,内皮细胞功能障碍是造成血管病变的始动因素和病理基础.内皮细胞衍生的一氧化氮(Nitride Oxide,NO)生物利用度降低和活性氧簇(Reactive Oxygen Species,ROS)生成过量是导致内皮功能紊乱的一个重要因素.在病理情况下血液中血管紧张素Ⅱ(Angiotensin,AngⅡ)的浓度升高,可导致血管内皮细胞功能损伤.α-细辛醚是中药石菖蒲中的活性成分之一,具有调节血脂、镇静、抗炎等作用.目的：我们前期的研究表明,在正常的人脐静脉内皮细胞(HUVECs/EA.hy926),α-细辛醚可以上调eNOS Ser1177磷酸化,介导内皮细胞NO合成增加.为了探讨α-细辛醚在AngⅡ刺激内皮细胞中是否具有保护内皮细胞功能的作用,我们进一步开展了此项研究.方法：实验采用EA.hy926细胞,利用荧光染色法检测细胞内的O和NO水平,蛋白免疫印记法检测eNOS Ser1177磷酸化水平,MTr法检测药物安全性.结果：EA.hy926细胞给予AngⅡ(10-7mol/L)孵育24 h,利用荧光染色法显示细胞内的O-水平显著上升,达正常对照组的1.34倍,差异有统计学意义(P＜0.05)；在LNAME预处理组,O-水平有所下降,与模型组相比有显著性差异(P＜0.05),提示升高的O-是由于eNOS脱偶联产生的；而NO水平在模型组则显著下降,为正常对照的0.89倍,差异有统计学意义(P＜0.01),而加入不同浓度的α-细辛醚(10,50,100μmol/L)预处理1h,再给予AngⅡ(10-7 mol/L)孵育24h,α-细辛醚以浓度依赖性的方式抑制AngⅡ诱导的细胞内O-的升高,Imax为(116.77±13.18)％ (P ＜0.01),同时,α-细辛醚还可以上调AngⅡ诱导的细胞内NO水平的下降,Emax为(61.70±13.27)％ (P ＜0.01).此外,蛋白免疫印记实验显示,在正常EA.hy 926细胞,给予乙酰胆碱(Ach) 10-5 mol/L孵育0,2,5,10,15,30,60min,ACh可以上调eNOS Ser1177位点的磷酸化,而且呈双峰型表达,2min显著增加,随后则急剧下降,然后缓慢上升,于30min达第二个峰值.Emax发生于30min,为正常对照(0min)的5.5倍,差异有极显著性统计学意义(P＜0.01).AngⅡ(10-7 mol/L)孵育EA.hy 926细胞24h后再给予ACh(10-5 mol/L)刺激,eNOS总蛋白无明显改变,但eNOS Ser1177磷酸化蛋白的时间曲线明显消失,呈显著降低表现,与正常对照组相比,差异有统计学意义.若使用α-细辛醚(10-5mol/L)预处理1h后,再给予AngⅡ(10-7 mol/L)孵育24 h,然后再给予ACh(10-5 mol/L)刺激0～60 min,eNOS Ser1177磷酸化蛋白表达有所回升,时间曲线接近正常对照组,与模型组比较有显著性差异(P＜0.05).MTT实验显示α-细辛醚1 ～ 100μmo]/L孵育EA.hy926细胞24 h,细胞增殖能力均在105％ ～ 114.5％之间,与正常对照组相比,无统计学差异,提示α-细辛醚在100μmol/L的浓度范围内处理EA.hy926细胞24 h是安全的.结论：通过本研究证实,α-细辛醚对EA.hy926细胞内AngⅡ诱导的ROS水平均有不同程度的抑制作用,同时可以上调AngⅡ诱导的细胞内NO水平的下降,并具有浓度依赖性,考虑可能和其抗氧化活性有关.在AngⅡ介导的EA.hy926细胞中eNOS Ser1177磷酸化不足的模型中,α-细辛醚预处理显著保护了这种损伤,提示α-细辛醚有可能除了通过抗氧化作用之外,还可以通过保护eNOS的磷酸化而发挥保护内皮功能的作用.经安全性考察证实α-细辛醚在100μmol/L以内处理内皮细胞24h对细胞的增殖能力无影响.