对虾急性肝胰腺坏死综合症致病菌的免疫磁珠捕获-PCR快速检测方法的建立

来源 :第二十次全国环境微生物学学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ccb332
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  急性肝胰腺坏死病(AHPND)是由含有毒性质粒的弧菌菌株引起的新型对虾病。该病给全世界对虾养殖业造成巨大影响,因此AHPND致病菌的检测和预防对对虾养殖至关重要。本研究基于副溶血弧菌OmpU建立了免疫磁珠捕获-PCR的方法用于检测AHPND致病菌株。首先通过对AHPND致病菌外膜蛋白OmpU基因克隆、生物信息学分析,推测OmpU在弧菌中具有交叉免疫原性,可以作为弧菌免疫分离的靶标。然后制备OmpU多克隆抗体,分析副溶血弧菌OmpU在弧菌种内及种间的免疫学特性,结果显示副溶血弧菌OmpU抗体能与包括AHPND致病菌在内的弧菌产生种内、种间的交叉反应,与非弧菌细菌不产生或产生较弱的反应,也证实了OmpU抗体能够识别弧菌的OmpU抗原表位。综合说明弧菌OmpU是一种交叉抗原,可以作为免疫磁珠分离的靶标,其抗体可以用来制备免疫磁珠分离弧菌。以外膜蛋白OmpU用作免疫捕获靶标分离AHPND病原体,然后以AHPND质粒的两个毒性基因(pirA和pirB)的特异性片段作为PCR引物,研究建立弧菌免疫磁珠捕获-PCR检测体系。
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