【摘 要】
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本研究通过同源克隆的方法从爪哇根结线虫(Meloidogyne javanica)cDNA中克隆获得南方根结线虫(M.incognita)Mi4D01基因的同源基因Mj4 D01.Mj4D01 ORF全长525bp,共编码174个氨基酸,在C端含有一个与秀丽小杆线虫(C.elegans)同源的Ground-like domain.通过初步分析,该基因N端前24个氨基酸编码信号肽,去除信号肽后无跨膜
【机 构】
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华南农业大学植物线虫研究室,广州510642
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本研究通过同源克隆的方法从爪哇根结线虫(Meloidogyne javanica)cDNA中克隆获得南方根结线虫(M.incognita)Mi4D01基因的同源基因Mj4 D01.Mj4D01 ORF全长525bp,共编码174个氨基酸,在C端含有一个与秀丽小杆线虫(C.elegans)同源的Ground-like domain.通过初步分析,该基因N端前24个氨基酸编码信号肽,去除信号肽后无跨膜结构域.以该基因的80～212 bp序列设计特异探针进行原位杂交,发现该基因定位在爪哇根结线虫亚腹食道腺.同时,龄期表达结果显示,该基因在三龄幼虫阶段表达量最高.为进一步分析该基因功能,利用酵母双杂技术,以去掉信号肽的Mj4D01为诱饵,对接种了二龄爪哇根结线虫的拟南芥cDNA文库进行杂交筛选,共获得了32个Mj4D01的互作候选蛋白.通过基因序列以及相关功能分析,初步筛选出6个可能的互作蛋白,扩增其中4个潜在的互作蛋白基因全长并进行酵母共转互作验证,最终获得一个与Mj4D01在酵母中相互作用的蛋白,即Arabidopsis thaliana mRNA for rieske iron-sulfur protein precursor(petC gene).该蛋白为里斯克铁硫蛋白前体物,可能参与植物活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生,推测Mj4D01可能通过影响ROS从而影响了植物的防卫反应.Mj4D01在植物体内如何影响ROS有待进一步研究.
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