【摘 要】
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根结线虫(Meloidogyne spp.)通过分泌效应蛋白协助其自身完成对寄主植物的入侵和寄生.之前的研究发现象耳豆根结线虫(M.enterolobii)可分泌效应蛋白MeTCTP以帮助其对寄主的寄生,为了深入了解MeTCTP在象耳豆根结线虫侵染寄主过程中发挥的具体功能,笔者利用大肠杆菌表达系统对MeTCTP进行表达纯化及对其结晶条件进行筛选.本研究先利用PCR扩增获得MeTCTP基因全长,将其
【机 构】
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华南农业大学植物线虫研究室,广州510642
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根结线虫(Meloidogyne spp.)通过分泌效应蛋白协助其自身完成对寄主植物的入侵和寄生.之前的研究发现象耳豆根结线虫(M.enterolobii)可分泌效应蛋白MeTCTP以帮助其对寄主的寄生,为了深入了解MeTCTP在象耳豆根结线虫侵染寄主过程中发挥的具体功能,笔者利用大肠杆菌表达系统对MeTCTP进行表达纯化及对其结晶条件进行筛选.本研究先利用PCR扩增获得MeTCTP基因全长,将其插入原核表达载体PET21b中,构建重组表达质粒PET21b-MeTCTP,将重组表达质粒转入大肠杆菌表达感受态BL21 (DE3)中,利用IPTG诱导表达,诱导产物采用镍离子亲和层析,离子交换和分子筛等方法纯化,采用坐滴法进行结晶条件的初筛.结果 表明：MeTCTP在0.2mmoL/L IPTG,16℃,200r/min条件下,经18h诱导培养、纯化后,可获得纯度较高的可溶的重组蛋白.经坐滴法初步筛选获得适宜的结晶条件.MeTCTP蛋白晶体的获得为后续进一步对该蛋白结构功能的研究奠定了基础.
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