【摘 要】
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目的： 为了解OPCML在卵巢癌中的功能,以及慢病毒载体(lentiviral vector)作为体外转基因工具的高效性和可行性.方法 根据GenBank上的序列,从CD1小鼠上克隆了OPCML基因,将之克隆到慢病毒载体pWPI-GFP,构建了慢病毒表达质粒pWPI-OPCML,将pWPI-OPCML+pCMV.dR874+pMDG共转染293T细胞获得携带有OPCML的重组慢病毒,用病毒上清感染
【机 构】
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广西医科大学肿瘤医院妇瘤科 加拿大渥太华大学癌症中心
【出 处】
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第七届亚洲临床肿瘤学大会暨第九届全国临床肿瘤学大会
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目的： 为了解OPCML在卵巢癌中的功能,以及慢病毒载体(lentiviral vector)作为体外转基因工具的高效性和可行性.
方法 根据GenBank上的序列,从CD1小鼠上克隆了OPCML基因,将之克隆到慢病毒载体pWPI-GFP,构建了慢病毒表达质粒pWPI-OPCML,将pWPI-OPCML+pCMV.dR874+pMDG共转染293T细胞获得携带有OPCML的重组慢病毒,用病毒上清感染靶细胞(A2780,OCC1,RM及MOSE),通过细胞增殖试验、细胞聚合力试验及体内成瘤试验等来研究OPCML在卵巢癌中的功能.
结果 ①OPCML能被重组慢病毒高效地转导入靶细胞,效率几乎达100％,同时达到稳定的表达,Westernblot能检测到OPCML(60kDa)和GFP(27kDa)蛋白.②细胞增殖试验显示,在A2780和RM细胞,转入OPCML后细胞的增殖明显的比未转基因(A2780,RM)或仅转空载体(A2780-pWPI和RM-PWPI)者慢(P＜0.01),但在OCC1细胞系,OPCML对细胞的增殖无明显的影响(P＞0.05);③FCM(流式细胞仪)对细胞周期检测显示OPCML对A2780细胞的细胞周期有明显的滞留作用,但对OCC1、RM、MOSE细胞无明显滞留作用(P＞0.05);④细胞聚合力试验显示OPCML能明显增强细胞的粘附力;⑤移植瘤试验显示,将A2780-OPCML注射到裸皮下,仅有一个(1/4)有肿瘤生长,体积显著的小于A2780及A2780-pWPI组(P＜0.001);但在RM组,RM-OPCML和对照组RM-pWPI之间肿瘤大小和成瘤情况无明显差异(P＞0.05).
结论 重组的慢病毒作为转基因的工具,具有高效,同时能使目的基因达到持续稳定的表达;OPCML能够抑制A2780,RM生长;OPCML能够增加细胞的粘附能力,抑制肿瘤的转移;在体内能肿瘤的形成和生长,可能是一个新的抑癌基因.
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