【摘 要】
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目的：观察胚胎干细胞在体外不同分化因子诱导作用下向血管内皮细胞和平滑肌细胞分化的能力，为血管组织工程提供种子细胞。方法：取孕12.5～14.5d的胎鼠，制作小鼠胚胎成纤维细胞饲养层。在饲养层上培养扩增胚胎干细胞。将扩增后生长状态好的胚胎干细胞以差速贴壁法将饲养层细胞去掉，悬滴法培养胚胎干细胞形成拟胚体。将拟胚体分别应用转化生长因子β1+血管内皮细胞生长因子诱导内皮细胞及不同时间段加入维甲酸、转化生
【机 构】
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南昌大学第二附属医院血管外科,江西省南昌市 330006
【出 处】
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第三届全国血管外科和组织工程学术会议暨第二届全国下肢血管疾病论坛
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目的：观察胚胎干细胞在体外不同分化因子诱导作用下向血管内皮细胞和平滑肌细胞分化的能力，为血管组织工程提供种子细胞。
方法：取孕12.5～14.5d的胎鼠，制作小鼠胚胎成纤维细胞饲养层。在饲养层上培养扩增胚胎干细胞。将扩增后生长状态好的胚胎干细胞以差速贴壁法将饲养层细胞去掉，悬滴法培养胚胎干细胞形成拟胚体。将拟胚体分别应用转化生长因子β1+血管内皮细胞生长因子诱导内皮细胞及不同时间段加入维甲酸、转化生长因子β1、血小板源性生长因子进行诱导平滑肌细胞。采用RT-PCR和免疫组织化学方法验证诱导细胞的性质。
结果：两组实验中拟胚体贴壁后第2d胚体均略摊开，周围有上皮样细胞出现，诱导内皮细胞实验组中第3，4d有许多卵石样细胞产生，至第6d开始出现由卵石样细胞构成的管状结构，自胚体向周围呈辐射状生长，渐呈网状，诱导时间约2周。诱导平滑肌细胞实验组中11d后拟胚体的周围出现大量的圆形细胞，也可见血管样结构，约3周后拟胚体周围有大量的血管样结构。经过RT-PCR检测及免疫组织化学染色分别检测诱导细胞，均有相应的特征性产物表达，证明诱导的细胞是内皮细胞及平滑肌细胞。
结论：①转化生长因子β1+血管内皮细胞生长因子能诱导胚胎干细胞为内皮细胞;②胚胎干细胞在特定的条件下可以分化为血管平滑肌细胞。随着细胞纯度和活性等问题的进一步解决，胚胎干细胞将有可能成为血管组织工程的种子细胞。
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