【摘 要】
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虽然支原体是富含酶类,但是支原体是一种脂肪酸营养缺陷型菌,脂肪酶的存在可能为支原体的生长提供长链脂肪酸.猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)的P65 脂蛋白是其主要免疫源性的蛋白,P65 蛋白主要通过破坏宿主肺泡细胞的表面张力来降低宿主细胞的稳定性,导致肺脏功能性障碍.同时p65 蛋白具有脂肪酶活性,能够促进脂肪分解,可为猪Mhp 生长提供必需的短链脂肪酸.Mh
【机 构】
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江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京 210014
【出 处】
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江苏省畜牧兽医学会2017年学术年会
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虽然支原体是富含酶类,但是支原体是一种脂肪酸营养缺陷型菌,脂肪酶的存在可能为支原体的生长提供长链脂肪酸.猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)的P65 脂蛋白是其主要免疫源性的蛋白,P65 蛋白主要通过破坏宿主肺泡细胞的表面张力来降低宿主细胞的稳定性,导致肺脏功能性障碍.同时p65 蛋白具有脂肪酶活性,能够促进脂肪分解,可为猪Mhp 生长提供必需的短链脂肪酸.Mhp 168 强弱毒株具有不同的毒力,推测脂酶在其中其一定作用.因此,我们分析了Mhp 的脂酶活性,并对P65 蛋白的脂酶活性进行了分析.对Mhp 168 强弱毒株培养物进行离心收获,冻融裂解,获得了全菌蛋白.用脂肪酶特异性底物4-硝基苯基棕榈酸酯(4-Nitrophenyl palmitate),通过反应液和底物浓度等优化,建立了脂酶活性测定的酶学方法.应用该方法对Mhp 168 强弱毒株全菌蛋白进行酶学分析,发现Mhp 168 强毒株的脂酶活性高于弱毒株,且呈剂量依赖关系.从猪肺炎支原体基因组中扩增P65 基因,构建了原核表达载体,转化大肠杆菌,结果获得了重组表达的Mhp P65 蛋白.应用酶学测定方法测定了P65 的脂酶活性,pH 和温度对脂酶活性的影响.结果显示,重组表达的Mhp P65 蛋白具有脂酶活性,pH 8.0 和37℃是其最适反应条件.本研究证实Mhp 168 强毒株的脂酶活性高于弱毒株,且Mhp 的重组P65 蛋白也具有脂肪酶活性,提示P65 蛋白在Mhp的致病中具有一定作用,为该病原的致病因子研究提供了基础.
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