【摘 要】
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目的：建立一种基于多重实时荧光相对定量PCR技术并应用之于唐氏综合征分子诊断。方法：选择21号染色体上特异区域基因片段(DSCR3)为目的基因，以12号染色体上的磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)为参照基因，设计合成两对引物以及分别以不同荧光标记的TaqMan探针，在同一个反应管中进行扩增。以相对定量指标△CT值区分唐氏综合征患者与正常人。采用EB病毒转化技术，把唐氏综合征患者外周血B淋巴细胞转化
【机 构】
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首都医科大学附属北京朝阳医院基础医学研究中心 100020 福建医科大学细胞生物学与遗传学系
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目的：建立一种基于多重实时荧光相对定量PCR技术并应用之于唐氏综合征分子诊断。
方法：选择21号染色体上特异区域基因片段(DSCR3)为目的基因，以12号染色体上的磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)为参照基因，设计合成两对引物以及分别以不同荧光标记的TaqMan探针，在同一个反应管中进行扩增。以相对定量指标△CT值区分唐氏综合征患者与正常人。采用EB病毒转化技术，把唐氏综合征患者外周血B淋巴细胞转化成永生细胞系作为标准品。
结果：通过优化反应条件，使得目的基因和参照基因的扩增效率基本一致，接近100％，模板浓度在30ng/μl时，变异系数最小(<10％)，以该浓度的DNA作为模板进行批内和批间实验的△CT值重复性好。运用建立的方法检测20例唐氏综合征患者的血标本和30例正常人的血标本，两组之间无交叉重叠，有明显差异(P<0.001)。唐氏综合征患者永生细胞系建系成功。
结论：实时荧光定量PCR比较△CT值的相对定量法快速诊断唐氏综合征是可行的。
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