【摘 要】
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目的：本研究通过探讨ATM信号传导途径,为阐明自噬在肿瘤发生、发展中的分子机制,以及开发新的肿瘤放疗增敏药物提供理论依据；方法：细胞系：亲本MCF-7细胞系、同源性MCF-7细胞
【机 构】
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吉林大学公共卫生学院 卫生部放射生物学重点实验室,长春 130021
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目的：本研究通过探讨ATM信号传导途径,为阐明自噬在肿瘤发生、发展中的分子机制,以及开发新的肿瘤放疗增敏药物提供理论依据；方法：细胞系：亲本MCF-7细胞系、同源性MCF-7细胞系(ATM+/+)、(ATM-/-)；U251细胞系。自噬形态学变化采用电镜、GFP-LC3免疫荧光法及MDC染色法检测自噬小体。基因过表达质粒采用脂质体转染法,基因沉默质粒采用逆转录病毒转染方法。蛋白共定位： 激光共聚焦显微镜系统(confocal system)检测蛋白免疫荧光定位。蛋白表达检测：Western blot检测自噬标志性分子MAP-LC3的表达。细胞辐射敏感性检测：集落形成实验。结果：发生自噬的细胞电镜下可见到空泡状的自噬小体,稳定转染了GFP-LC3后激光共聚焦显微镜下可见绿色荧光蛋白在自噬小体内聚集,MDC染色法可见点状分布的自噬小体。与假照组相比,细胞4Gy照射后16小时MCF-7细胞系自噬小体明显增多。与ATM缺失的MCF-7(ATM-/-)细胞相比,western-blot检测MCF-7(ATM+/+)细胞照射后MAP-LC3II的表达明显增加。结论：ATM参与电离辐射诱导的自噬,其发生机制还有待于进一步研究。
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