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载体DNA的制备是构建大片段基因组文库的关键步骤之一，高质量载体DNA受到酶切、脱磷等因素的影响，以载体pBHYG为材料,优化了限制性内切酶胁HindⅢ酶切和小牛肠碱性磷酸酶(CLAP)脱磷的作用条件，并在T4连接酶作用下自连，通过胶回收纯化制备了可用于进一步构建大片段基因组文库的线性载体DNA。