【摘 要】
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本试验原核表达牛种布鲁菌VirB12蛋白,并检测其免疫原性.利用PCR方法从牛种布鲁菌基因组中扩增VirB12基因,克隆至pET-30a(+)载体上,构建重组质粒pETV12,转化大肠杆菌BL21(DE3
【机 构】
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辽宁医学院畜牧兽医学院,辽宁锦州 121001
【出 处】
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辽宁省畜牧兽医学会2014年学会年会
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本试验原核表达牛种布鲁菌VirB12蛋白,并检测其免疫原性.利用PCR方法从牛种布鲁菌基因组中扩增VirB12基因,克隆至pET-30a(+)载体上,构建重组质粒pETV12,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经组氨酸结合树脂柱纯化后,进行SDS-PAGE及Western blot分析.结果显示,PCR扩增获得519bp的目的基因片段;重组质粒经Nde I与Sal I酶切后,可见5422和519bp的片段,与预期值相符;测序结果未见突变;表达的重组蛋白相对分子质量约22000;纯化的重组蛋白纯度达94％,以形式表达,表达量占菌体总蛋白的％,可被布鲁菌免疫兔血清特异性识别.原核表达并纯化了布鲁菌VirB12蛋白,为进一步研究VirB12蛋白的结构、功能及相关疫苗的研制奠定了基础.
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