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本实验拟通过生物信息学分析和RT-PCR产物直接测序等方法获得并验证猪Xist基因及其外显子序列，并希望通过敲除供体细胞Xist基因来提高猪的克隆效率。
猪Xist基因部分外显子电子克隆与验证及靶除Xist基因载体的构建
【摘 要】
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本实验拟通过生物信息学分析和RT-PCR产物直接测序等方法获得并验证猪Xist基因及其外显子序列，并希望通过敲除供体细胞Xist基因来提高猪的克隆效率。
【机 构】
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华南农业大学动物科学学院,广州510642
【出 处】
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第六次全国动物生物技术学术研讨会
【发表日期】
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2011年6期
其他文献
sfatl基因综合考虑猪和小鼠的密码子使用频率后对其密码子进行了优化，在其阅读框外引入了SalI和NotI等酶切位点，连接至pUC57克隆载体上，经过测序验证载体构建成功，再经过SalI和NotI酶切回收后连接至脂肪特异性表达载体L28上，命名为FAB P4-sfatl-polyA-neo。经酶切，测序鉴定，sfatl脂肪特异性单标记载体构建成功。
通过overlap-PCR方法克隆得到的秦川牛SHH基因全序列与GenBank的序列一致。通过对其蛋白质的跨膜结构、信号肽及亚细胞定位分析表明，牛SHH基因是一个胞外表达的蛋白。在小鼠和人上的研究表明，SHH通过SHH-Ptc-Smo通路来发挥其功能，但牛作为反当动物，其脂肪发育机理与小鼠和人有很大的差异，SHH信号通路在牛脂肪沉积中的作用也有待进一步的探讨，本研究获得秦川牛SHH原核表达产物为进
本文经测序和细胞水平发光情况表明，该双启动子双报告基因真核表达载体构建成功，绿色荧光的表达先于红色荧光的表达，载体较小，易于导入细胞进行功能研究。
目的：构建在哺乳动物细胞中表达的山羊TLR2绿色荧光蛋白融合表达载体.方法：根据克隆到T载体上的山羊TLR2测序结果,设计一对不含终止子的引物,将山羊TLR2 PCR产物连接到pEGFP-NI载体上,用磷酸钙法转染293T细胞,并在荧光显微镜下观察.结果：重组质粒经酶切和测序鉴定正确,且在293T细胞中表达.融合蛋白发出的绿色荧光表明TLR2-EGFP主要分布在细胞膜上.结论：成功构建pEGFP-
本文构建了水牛抑制素基因的干扰片段，希望借助PB载体，通过转基因技术将其导入水牛体内，干扰抑制素的表达以达到提高水牛繁殖力的目的。经过颗粒细胞转染实验也证明，构建的干扰片段表达载体对抑制素的表达起到了一定的抑制作用。同时通过6418筛选获得了一批稳定的阳性细胞，为进行显微注谢技术和核移植技术进行转基因的研究提供了研究材料。
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角质细胞生长因子(KGF)及其受体在毛囊的发育和生长周期中起重要的调控及促进作用.本实验构建KGF毛囊特异性表达载体,以红色荧光蛋白为报告基因,通过脂质体悬浮转染法进行条件优化,将KGF导入小鼠ES细胞中,后期采用昆明小鼠的2细胞期胚胎进行卵裂球电融合,并将绿荧光ES细胞注入四倍体胚胎,移植到2.5天假孕昆明母鼠中,对四倍体补偿技术进行了探索研究,为今后利用这一技术生产转基因小鼠模型奠定基础.