【摘 要】
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目的：本研究的目的是筛选出醛固酮肾损害小鼠肾皮质差异表达的miRNA,进一步探讨慢性肾脏病的发病机理,为临床诊断及治疗提供新的靶点.方法：1.制各醛固酮肾损伤小鼠模型,分为假手术组、醛固酮灌注3天组、醛固酮灌注7天组,每组6例,留取肾皮质标本.2.利用miRNeasy Mini Kit(Qiagen)提取分离总RNA,使用Spectrophotometer OD-1000(OneDrop)检测RN
【出 处】
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中华医学会第十八次全国儿科学术会议
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目的：本研究的目的是筛选出醛固酮肾损害小鼠肾皮质差异表达的miRNA,进一步探讨慢性肾脏病的发病机理,为临床诊断及治疗提供新的靶点.方法：1.制各醛固酮肾损伤小鼠模型,分为假手术组、醛固酮灌注3天组、醛固酮灌注7天组,每组6例,留取肾皮质标本.2.利用miRNeasy Mini Kit(Qiagen)提取分离总RNA,使用Spectrophotometer OD-1000(OneDrop)检测RNA浓度.所提取的总RNA经过检测符合芯片实验的要求.3.利用AFFX MiRNA表达谱芯片实验进行miRNA的检测,经过数据转换和分析后,筛选出上调和下调的miRNA.4.通过逆转录和实时定量PCR技术验证芯片结果.5.应用StarBase数据库整合PITA、miRanda软件进行miRNA的交集靶基因预测,对交集靶基因进行GO富集分析和KEGG通路分析.结果：1.根据芯片结果,以实验组与对照组RQ≥2.0或RQ≤0.5为标准,筛选出10个有显著表达差异的miRNA,其中包括8个显著下调的miRNA,以及2个显著上调的miRNA.2.挑选出醛固酮灌注组显著上调的mmu-miR-183及显著下调的mmu-miR-1187进行实时定量PCR验证,结果显示miRNA表达与芯片结果表达趋势基本一致.3.利用Starbase数据库预测差异表达miRNA的交集靶基因,其中有6个存在交集靶基因,预测到的靶基因数共有232个,GO富集分析显示这些基因分布于110个群中(P＜0.05),与代谢、生长发育、转录调控、基因表达等过程有关,KEGG通路分析显示这些靶基因参与12个通路(P＜0.05),与细胞分裂、细胞凋亡、细胞增殖、肾脏炎症及纤维化相关.结论：1.使用芯片筛选出10个有显著表达差异的miRNAs.2.qRT-PCR验证结果与芯片表达趋势基本一致,证实了芯片结果具有一定的可靠性.3.差异表达的miRNA可能在醛固酮诱导的肾脏纤维化和炎症过程中发挥重要作用,为肾脏损害的病理机制提供新的理论依据.
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