MMPs抑制剂GM6001、MMP-2/9抑制剂Ⅰ及Ⅱ对人晶状体上皮细胞移行的抑制作用

• 作 者: 刘冬梅 李俊红
• 机 构: 030002 太原，山西医科大学 山西省眼科医院斜视与小儿眼科,030002 太原，山西医科大学 山西省眼科医院斜视与小儿眼科
• 出 处: 中华实验眼科杂志
• 发表日期: 2015年33期
• 关键词: 基质金属蛋白酶/抑制剂 上皮细胞/眼 晶状体/眼 细胞移行/药物作用 后囊膜混浊 Matrix metalloproteinase/inhibitorEpith

背景

白内障术后残留晶状体上皮细胞(LECs)的增生、移行、上皮–间质转化等生物学行为与晶状体后囊膜混浊(PCO)的发生有关，基质金属蛋白酶(MMPs)参与细胞的移行过程。广谱MMPs抑制剂GM6001能抑制人LECs的移行，但特异性MMPs抑制剂，即MMP-2/9抑制剂Ⅰ和Ⅱ对LECs移行能力的影响及药物的安全性尚不明确。

目的

比较GM6001、MMP-2/9抑制剂Ⅰ和MMP-2/9抑制剂Ⅱ对LECs移行的抑制作用及其对细胞活性的影响。

方法

对人LECs系进行培养和传代，取传至3～4代的细胞培养于6孔板中，当细胞生长融合至70%后改用无血清培养液作用12 h，在培养液中分别加入不同浓度(0. 25、0. 50、1. 00、2. 00、4. 00、8. 00、16. 00、32. 00、64. 00、128. 00 μmol/L)GM6001、MMP-2/9抑制剂Ⅰ和MMP-2/9抑制剂Ⅱ，以基础培养液培养的细胞作为对照组，用200 μl无菌枪头在细胞层中划出细胞裸露区，继续培养后24 h计算各组细胞移行的平均距离，计算各种药物对LECs移行的抑制率。在细胞活性的测定中，取传至第2代或第3代LECs，调整细胞密度至5×10⁵/ml，以200 μl/孔接种至96孔板常规培养，分别加入128. 00 μmol/L GM6001、64. 00 μmol/L MMP-2/9抑制剂Ⅰ和32. 00 μmol/L MMP-2/9抑制剂Ⅱ，以基础培养液培养的细胞作为对照组，培养24 h后用MTT法测定吸光度(A)值，分析并比较3种药物对LECs活性的影响，评估药物对细胞的毒性作用。

结果

正常培养的LECs生长良好，贴壁生长的细胞呈梭形或多边形，排列不规则。随着GM6001、MMP-2/9抑制剂Ⅰ和MMP-2/9抑制剂Ⅱ浓度的增加，LECs移行距离逐渐缩短，总体比较差异有统计学意义(GM6001：F＝248. 647，P<0. 05；MMP-2/9抑制剂Ⅰ：F＝357. 125，P<0. 05；MMP-2/9抑制剂Ⅱ：F＝396. 374，P<0. 05)。将对照组细胞移行距离设为1，3种药物浓度为32. 00 μmol/L时，GM6001组、MMP-2/9抑制剂Ⅰ组和MMP-2/9抑制剂Ⅱ组细胞的相对移行距离分别为0. 478±0. 091、0. 294±0. 088和0. 191±0. 081，总体比较差异有统计学意义(F＝116. 031，P<0. 01)，其中MMP-2/9抑制剂Ⅱ组中细胞移行距离明显低于GM6001组和MMP-2/9抑制剂Ⅰ组，差异均有统计学意义(均P<0. 01)。对照组、128. 00 μmol/L GM6001组、64. 00 μmol/L MMP-2/9抑制剂Ⅰ组和32. 00 μmol/L MMP-2/9抑制剂Ⅱ组的A值分别为0. 607±0. 016、0. 567±0. 015、0. 583±0. 010和0. 595±0. 014，总体比较差异无统计学意义(F＝1. 403，P>0. 05)。

结论

3种MMPs抑制剂均可有效抑制体外培养的LECs的移行，且对细胞的生长活性无明显影响，其中MMP-2/9抑制剂Ⅱ的抑制作用最强。