【摘 要】
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目的 体外筛选设计并合成的抑制效率最佳的短发夹核糖核酸(shRNA)序列,并观察慢病毒介导的环氧合酶-2(COX-2) shRNA对类风湿性关节炎(RA)患者滑膜细胞的影响.方法 首先根据人
【机 构】
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266000,青岛大学附属医院关节外科253100,山东省平原县第一人民医院脊柱关节外科;
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目的 体外筛选设计并合成的抑制效率最佳的短发夹核糖核酸(shRNA)序列,并观察慢病毒介导的环氧合酶-2(COX-2) shRNA对类风湿性关节炎(RA)患者滑膜细胞的影响.方法 首先根据人COX-2 mRNA序列自行设计4对不同的COX-2shRNA序列,然后包装合成分别含有各对序列的慢病毒载体,并将各组慢病毒载体分别转染RA患者滑膜细胞,通过实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)、酶联免疫吸附试验法(ELISA)分别检测转染后细胞基因水平及蛋白质水平的变化,从而筛选最佳抑制序列.结果 以慢病毒为载体介导的COX-2 shRNA基因转染滑膜细胞后,未观察到对细胞生长速度及细胞形态有明显负面影响,转染后COX-2 mRNA表达水平显著下降,从0.83±0.09、0.84±0.06降到0.15 ±0.01、0.15 ±0.01 (P＜0.05),相应组别的前列腺素E2(PGE2)[从(160.96±0.23) ng/L降到(84.44±1.02) ng/L]、血管内皮生长因子(VEGF)[从(93.10±0.84) ng/L降到(57.35±1.04) ng/L]、白细胞介素(IL)-1β[从(19.69 ±0.57) ng/L降到(10.60±0.53) ng/L]、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)[从(31.52 ±0.33) ng/L降到(14.55 ±0.59) ng/L]表达量显著降低(P＜0.05).结论 慢病毒介导的RNA干扰可以显著抑制RA患者滑膜细胞COX-2的表达,从而降低炎性因子的表达量.
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