大鼠Akt1基因真核表达载体的构建及其在293细胞中的表达

• 作 者: 张睿 程颖 刘永锋
• 机 构: 中国医科大学附属第一医院器官移植中心
• 出 处: 生物医学工程与临床
• 发表日期: 2007年6期
• 关键词: AKT1 真核表达载体 293细胞 Akt1 eukaryotic expression vector 293 cells

目的构建Akt1基因真核表达载体pDC316-Akt1，观察其在293细胞（人胚肾母细胞）中的表达。方法采用RT-PCR方法自大鼠肝组织总RNA中克隆Akt1 DNA片段，测序鉴定正确后，插入真核表达载体pDC316的EcoRⅠ、HindⅢ的酶切位点，构建Akt1真核表达载体Akt—pDC316，脂质体介导法转染293细胞，36h后Western blot检测转染293细胞中Akt1的含量。结果经测序鉴定，构建的Akt1氨基酸序列与野生型Akt1序列完全相符。将Akt-pDC316转入293细胞，可见55