【摘 要】
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为制备兔抗猪CD163多克隆抗体,采用RT-PCR方法从猪PAM RNA中扩增CD163胞质外区部分基因SRCR4-5,克隆至pGEX-6p-1原核表达载体,在IPTG诱导下获得约50 000以包涵体形式表达的重
【机 构】
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西北农林科技大学 动物医学院病毒免疫与生物信息研究室 生物信息研究中心 分子病毒免疫与肿瘤系统生物学研究组; 中国农业科学院 哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室 猪传染病研究室;
【基金项目】
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兽医生物技术国家重点实验室开放基金重点资助项目(SKLVBF200905);国家自然科学基金资助项目(31072115;30270342);“十二五”国家科技计划农村领域基础研究类首批预备项目(NC2010CD0178)
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为制备兔抗猪CD163多克隆抗体,采用RT-PCR方法从猪PAM RNA中扩增CD163胞质外区部分基因SRCR4-5,克隆至pGEX-6p-1原核表达载体,在IPTG诱导下获得约50 000以包涵体形式表达的重组蛋白。WesternBlotting分析表明,表达产物能够被GST单抗所识别。用该重组蛋白免疫兔制备多抗血清,经间接ELISA检测,多抗血清效价可达105,流式检测发现可与Marc-145和PAM上的天然CD163分子相互作用。抗体阻断试验证明制备的多抗血清可以部分阻断PRRSV感染。本试验为进一步研究PRRSV与受体-CD163相互作用机制打下了基础。
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