【摘 要】
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目的 :建立CHO/dhfr-细胞的定点整合和表达系统。方法 :利用常规分子生物学方法 ,构建了一个新的高效筛选表达载体 ,该载体含有一个由FRT(flprecombinationtarget)位点、报告
【机 构】
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军事医学科学院生物工程研究所; 军事医学科学院生物工程研究所 北京100071; 北京100071; 北京100071;
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划 (“863”计划 )资助项目(2 0 0 1AA2 15 3 5 1)
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目的 :建立CHO/dhfr-细胞的定点整合和表达系统。方法 :利用常规分子生物学方法 ,构建了一个新的高效筛选表达载体 ,该载体含有一个由FRT(flprecombinationtarget)位点、报告基因 (LacZ)及筛选基因 (zeocin)三片段构成的融合基因 ,而且该基因的表达受一个弱化的SV4 0启动子的控制。借助于随机整合及高效筛选 ,实现FRT位点在CHO/dhfr-细胞基因组中转录活跃区的整合 ,然后利用该位点介导的特异性重组实现了目的基因 (单链抗体 尿激酶融合基因 )的定点整合和有效表达 ,而且随后通过DHFR/MTX系统的加压扩增 ,以提高单链抗体 尿激酶融合基因在宿主细胞中的表达水平。结果与结论 :获得了能够实现外源基因在基因组中定点整合和有效表达的CHO/dhfr-细胞系 ,并利用该细胞系实现了单链抗体 尿激酶融合基因的高表达 ,表达量达到 5 μg/ (10 6细胞·2 4h)。
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