人源化抗人肺癌单域抗体基因的构建、表达及活性分析

• 作 者: 王阶平 庄国洪 杨桂旺 王臻 李文珠 谢莲英 颜江华
• 机 构: 厦门大学生命科学学院,厦门大学医学院抗癌研究中心,厦门大学生命科学学院,厦门大学生命科学学院,厦门大学生命科学学院,厦门大学生命科学学院,厦门大学医学院抗癌研究中心 福建厦门361005,福建厦门36
• 出 处: 细胞与分子免疫学杂志
• 发表日期: 2006年02期
• 关键词: 人源化 抗人肺癌单域抗体 表达 活性分析

目的:构建人源化的抗人肺癌单域抗体hu3D3VH基因,在大肠杆菌中表达,对其蛋白活性进行分析。方法:采用CDR移植技术对mAb3D3的重链可变区进行人源化,通过重叠PCR获得hu3D3VH的基因。构建pET22(b+)/hu3D3VH表达载体,并转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下表达。表达产物通过Ni亲和层析柱纯化。采用间接ELISA和竞争抑制ELISA法进行活性分析。结果:通过重叠PCR获得序列正确的目的基因。目的蛋白以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上。纯化后,目的蛋白的纯度达95%以上。hu3D3VH具有与亲本抗体相同的抗原反应性,并能抑制mAb3D3与L342细胞的结合。结论:获得的人源化单域抗体hu3D3VH,保留了与mAb3D3相同的反应性和特异性,为进一步临床应用奠定了基础。