人膀胱癌bcl-2-siRNA慢病毒载体的构建及稳定转染细胞株的建立

• 作 者: 许可慰 董文 李奎庆 张彩霞 黄海 韩金利
• 机 构: 510120,广州,中山大学孙逸仙纪念医院泌尿外科,510120,广州,中山大学孙逸仙纪念医院泌尿外科,510120,广州,中山大学孙逸仙纪念医院泌尿外科,510120,广州,中山大学孙逸仙纪念医院泌
• 出 处: 中华实验外科杂志
• 发表日期: 2011年28期
• 关键词: 膀胱癌 bcl-2 siRNA 慢病毒载体 Bladder carcinoma bcl-2 siRNA Lentiviral vector

目的 构建表达人膀胱癌bcl-2基因的小分子RNA(siRNA)的慢病毒载体并建立稳定转染细胞株.方法 根据GenBank提供的bcl-2 cDNA序列,设计3条针对bcl-2 siRNA序列,分别构建pSIH1-H1-copGFP重组质粒.筛选出最有效沉默靶基因的siRNA后,将携带目的 序列的慢病毒载体转染到293T细胞中,感染膀胱癌细胞株T24,建立稳定转染细胞株.结果 设计的针对bcl-2的序列中第3条的抑制效果最好,下调59.0%.以此目的 序列构建稳定转染细胞株,对bcl-2 mRNA抑制率达65.6%,对bcl-2蛋白的抑制率高达74.5%.结论 成功构建表达人膀胱癌bcl-2-siRNA的慢病毒载体,它能有效沉默bcl-2基因在膀胱癌细胞株T24中的表达并建立了稳定转染细胞株。