【摘 要】
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目的：表达和纯化具有生物学活性的重组人中期因子蛋白。方法：应用RT—PCR从人肝细胞癌组织总RNA中扩增中期因子cDNA，将其克隆到表达载体pET-24a，在大肠杆菌中诱导表达，经肝素-琼脂
【机 构】
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第二军医大学东方肝胆外科医院分子肿瘤实验室
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目的：表达和纯化具有生物学活性的重组人中期因子蛋白。方法：应用RT—PCR从人肝细胞癌组织总RNA中扩增中期因子cDNA，将其克隆到表达载体pET-24a，在大肠杆菌中诱导表达，经肝素-琼脂糖亲和层析柱纯化，应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、Western印迹和细胞增殖试验对纯化产物进行分析鉴定。结果：构建的重组质粒pET—HMK能在大肠杆菌中高表达，诱导表达的蛋白主要存在于包涵体中，经肝素琼脂糖柱亲和层析后纯化产物呈单一条带，特异性抗体反应证实是重组人中期因子，细胞增殖试验显示其能育效促进NIH3T3细胞
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