小鼠肾脏特异性miR-29c表达载体的构建与鉴定

• 作 者: 黄海燕 肖漓 何秀云 许晓光 樊文梅 魏玉香 马锡慧 孔祥瑞
• 机 构: 解放军309医院全军器官移植研究所北京市器官移植与免疫调节重点实验室
• 出 处: 解放军医药杂志
• 发表日期: 2015年7期
• 关键词: 转录启动子 肾移植 微RNAS 钙黏着糖蛋白类 Transcription initiation site Kidney transplantation M
• 基金项目: 国家自然科学基金资助项目（81202336）, 中国博士后科学基金（2013M532186）

目的构建载体实现miR-29c在肾脏组织的特异性表达。方法分别以质粒pc DNA 3.1（＋）和小鼠基因组DNA为模板,扩增CMV增强子序列和肾脏特异性钙黏着素蛋白KSP-cadherin启动子序列;将连接成的单一片段酶切后替换p CAGGS载体上的CAG启动子构成目的载体p CMV-KSP。将GFP编码区序列或小鼠miR-29c前体及两侧序列克隆到构建的载体上观察转染后目的基因的表达。结果从相应的模板上扩增出的序列经验证后连接到了p CAGGS载体上,转染细胞后在荧光显微镜下观察到KSP启动子调控下的G