【摘 要】
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构建游离态BAFF及其受体突变体的表达载体,采用大肠杆菌系统进行表达,并优化温度、诱导物浓度对蛋白表达的影响.分别提取K562细胞系mRNA和小鼠脾脏组织mRNA,进行逆转录,后经P
【机 构】
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南京大学生命科学学院,医药生物技术国家重点实验室,江苏南京210093
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构建游离态BAFF及其受体突变体的表达载体,采用大肠杆菌系统进行表达,并优化温度、诱导物浓度对蛋白表达的影响.分别提取K562细胞系mRNA和小鼠脾脏组织mRNA,进行逆转录,后经PCR扩增,获取BAFF和BAFF受体的基因片段,采用单因素实验,选取不同温度及诱导物浓度梯度诱导表达,探索重组蛋白表达的最适条件,提高目标蛋白表达量及可溶性蛋白含量.结果表明BAFF受体突变体在37℃,1 mmol/L IPTG诱导条件下表达量可达到25％左右,且可溶性蛋白含量均高于60％;可溶性BAFF的最适诱导条件为28℃,1 mmol/LIPTG,表明温度可显著提高其可溶性蛋白的含量.BAFF及其受体突变体的克隆和表达,为BAFF及其受体生物学功能的深入研究奠定了坚实的基础.
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