【摘 要】
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【目的】构建髓磷脂相关抑制物A(Nogo-A)基因sh RNA表达质粒,探讨沉默Nogo-A对脂多糖(LPS)诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)释放炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白
【机 构】
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增城市人民医院,中山大学附属博济医院神经内科,中山大学孙逸仙纪念医院神经内科
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【目的】构建髓磷脂相关抑制物A(Nogo-A)基因sh RNA表达质粒,探讨沉默Nogo-A对脂多糖(LPS)诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)释放炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的调节作用,以及对PC12细胞表达酪氨酸羟化酶(TH)的影响。【方法】构建Nogo-A基因sh RNA表达质粒,荧光定量PCR法、Western Bolt法检测细胞中Nogo-A蛋白及m RNA的表达;用不同浓度LPS处理PC12细胞24 h,CCK8法检测细胞活力,选取合适浓度LPS做后续试验;将PC12细胞分为对照组、p Genesil-1.1+LPS组以及p Genesil-nogo A-sh RNA+LPS组,各组细胞相应处理24 h后,用ELISA法检测各组上清液中的TNF-α和IL-6的含量,Western blot检测TH的表达。【结果】构建出Nogo-A基因sh RNA表达质粒,p Genesil-nogo A-sh RNA组PC12细胞的m RNA及蛋白水平均下调,具有明显的统计学差异(P<0.05);随着LPS浓度的增加,PC12细胞的活力逐渐下降;与对照组比,LPS组上清液中TNF-α和IL-6的含量明显增多,TH的表达明显降低;而与LPS对照组比较,p Genesil-nogo A-sh RNA+LPS组的上清液中TNF-α和IL-6的含量明显减少,TH的表达明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。【结论】LPS可激活PC12细胞分泌炎症因子及降低TH表达,沉默Nogo-A基因对此现象有调节作用。
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